Centros de unión de nucleótidos en el subfragmento 1 de miosina.

Resumen

LA CAPACIDAD DE UNION DE MIOSINA A ACTINA ASI COMO SU CAPACIDAD DE HIDROLISIS DE ATP SE ENCUENTRAN LOCALIZADAS EN UNA PARTE DE SU MOLECULA, SEPARABLE DEL RESTO POR PROTEOLISIS, DENOMINADA SUBFRAGMENTO 1 O SF1. CON OBJETO DE APORTAR NUEVOS DATOS PARA LA IDENTIFICACION DE LOS CENTROS DE UNION DE NUCLEOTIDOS EN SF1 Y SU FUNCIONALIDAD, SE HA ESTUDIADO EL EFECTO DE ANIONES, NUCLEOTIDOS Y TRATAMIENTO CON TRIPSINA SOBRE LA ACTIVIDAD DE SF1 ASI COMO SOBRE SUS PROPIEDADES DE ASOCIACION/DISOCIACION CON ACTINA. LOS RESULTADOS OBTENIDOS MUESTRAN COMO LOS ANIONES NO NUCLEOTIDEOS ENSAYADOS ASI COMO EL ATP INDUCEN LA DISOCIACION DE LOS COMPLEJOS ACTO-SF1, MIENTRAS QUE EL ADP NO ES CAPAZ DE PRODUCIR DICHO EFECTO. LA HIDROLISIS CON TRIPSINA DE SF1 NO MODIFICA EL COMPORTAMIENTO DE ESTOS ANIONES SOBRE EL PROCESO DE ASOCIACION/DISOCIACION DE ACTO-SF1. SIN EMBARGO, EL FRAGMENTO SF1 MODIFICADO POR TRIPSINA PRESENTA UN DIAGRAMA DE EADIE-HOFSTEE PARA SU ACTIVIDAD CA2+-ATPASA MONOFASICO EN LUGAR DE BIFASICO COMO OCURRE EN SF1 NATIVA. IGUALMENTE, LA HIDROLISIS POR TRIPSINA MODIFICA EL EFECTO QUE DISTINTOS ANIONES EJERCEN SOBRE LA ACTIVIDAD CA2+-ATPASA DE SF1. EL EMPLEO DEL MARCADOR QUIMICO PIRIDOXAL-5'-FOSFATO HA PERMITIDO IDENTIFICAR UN RESIDUO LISINA RELACIONADO CON EL CENTRO ACTIVO EN EL FRAGMENTO DE 25KDA DE SF1. POR SU PARTE, EL FLUORESCEIN ISOTIOCIANATO SE INCORPORA ESPECIFICAMENTE A DOS RESIDUOS DE LOS FRAGMENTOS DE 20 Y 50KDA RESPECTIVAMENTE, UNO DE LOS CUALES DEBE FORMAR PARTE DEL CENTRO ACTIVO. SE SUGIERE QUE EL CENTRO CATALITICO DE SF1 NO SOLO ESTA CONSTITUIDO POR UNA REGION DEL FRAGMENTO DE 25KDA SINO QUE NECESARIAMENTE DEBE DE IMPLICAR UNA REGION DE LOS FRAGMENTOS DE 20 O 50KDA QUE APORTARIA LA ZONA DE INTERACCION CON EL FOSFATO TERMINAL DEL ATP. DE ESTOS DOS ULTIMOS FRAGMENTOS, EL NO IMPLICADO EN EL CENTRO CATALITICO FORMARIA PARTE DE UN CENTRO DE UNION DE NUCLEOTIDOS RELACIONADO CON LA DISOCIACION DE LOS COMPLEJOS DE ACTO-SF1.