Estudio farmacéutico de distintos estados de agregación de anfotericina B

Resumen

Esta tesis doctoral se ha basado en el estudio físico-químico y farmacológico de los diversos estados de agregación a los que dan lugar las moléculas de anfotericina B (AMB) cuando se asocian. Para ello, en primer lugar se preparan formulaciones con excipientes aptos para su administración in vivo por vía parenteral que contienen la AMB en diferentes estados de agregación (monomérico, dimérico y poliagregado), y a continuación se lleva a cabo una caracterización in vitro de dichos estados de agregación mediante análisis espectrofotométrico, análisis del tamaño de partícula y estudios de toxicidad de las formulaciones. Se comprueba que el estado de agregación está íntimamente relacionado con la toxicidad, siendo el estado poliagregado es el que presenta menor toxicidad, tanto aguda como hemolítica. Además, se observa que las formulaciones de poliagregados de AMB presentan polidispersión de tamaño y que cuanto mayor es el tamaño de las fracciones de los poliagregados menor es su toxicidad hemolítica. La caracterización de las formulaciones de AMB se completa con la realización de un estudio farmacocinético in vivo, para lo cual previamente se pone a punto un método de análisis de AMB en muestras biológicas mediante HPLC. Las formulaciones de AMB ensayadas son las siguientes: formulación de poliagregados de AMB libres ("P-AMB"), formulación de poliagregados de AMB microencapsulados (microesferas de AMB: "MP-AMB") y formulación similar a la formulación de referencia Fungizona® que contiene AMB en estado dimérico ("D-AMB"). El seguimiento farmacocinético de las tres formulaciones pone de manifiesto que los poliagregados se acumulan principalmente en los órganos que constituyen el sistema retículo-endotelial (higado y bazo) mientras que la AMB dimérica se acumula mayoritariamente en los riñones, lo cual se asocia con su elevada toxicidad renal. Una vez caracterizados los diferentes estados de agregación, se estudia la eficacia in vivo mediante el empleo de un modelo de infección de candidiasis murino, estableciendo regímenes de dosificación tanto unidosis como multidosis. En el estudio unidosis, las formulaciones de poliagregados, tanto libres como microencapsulados, se administran a dosis 10 veces superiores que la formulación convencional, lo cual es posible gracias a su menor toxicidad. El incremento de la dosis tanto de "P-AMB" como de "MP-AMB" lleva a un aumento del porcentaje de supervivencia, por encima del alcanzado con la formulación de referencia. Con respecto a los estudios multidosis, se ensayan dos pautas posológicas diferentes, encontrándose que la pauta consistente en la administración de una dosis semanal de 5 mg/Kg de AMB en forma de poliagregados libres, durante 6 semanas, aumenta significativamente el porcentaje de supervivencia de los ratones y mantiene el efecto durante más tiempo en comparación con el tratamiento consistente en la administración de una dosis inicial de 10 mg/Kg y una dosis de recuerto de 3 mg/Kg a las tres semanas. Aunque no existe diferencia significativa en la eficacia de las tres formulaciones de AMB, existe diferencia en la potencia: las formulaciones poliagregadas se tienen que administrar a dosis superiores que la formulación convencional para alcanzar la misma actividad antifúngica. Por otro lado, la determinación de los niveles de urea en plasma revela que todas las formulaciones ensayadas producen nefrotoxicdad. Sin embargo, el tratamiento con la formulación convencional (dimérica) da lugar a una atrofia unilateral que no aparece en los ratones tratados con la formulación poliagregada. Finalmente, se puede concluir que el grado de agregación que adoptan las moléculas de AMB en el medio tiene una gran influencia tanto en sus propiedades como en la toxicidad y actividad de las formulaciones que incluyen este principio activo. La formulación "P-AMB" es una buena candidata para el tratamiento sistémico de candidiasis puesto que aporta una buena relación beneficio/riesgo y beneficio/coste.