Terapia génica basada en transfección mediante transposones del gen del pedf en un modelo de neovascularización coroidea en rata

Resumen

La neovascularización coroidea (NVC) es un proceso patológico presente en varias enfermedades oculares como es el caso de la forma húmeda de la degeneración macular asociada a la edad (DMAE). Durante este proceso los vasos de la coroides penetran en la retina alterando su estructura y causando edema y hemorragia lo cual da lugar a una pérdida severa de visión. Este proceso angiogénico tiene lugar cuando se produce un desequilibrio entre los factores proangiogénicos, como el vascular endotelial growth factor (VEGF), y los antiangiogenicos, como el pigment epithelium-derived factor (PEDF). Los tratamientos actuales empleados en la clínica consisten en la inyección intravítrea de moléculas anti-VEGF (Bevacizumab, Ranibizumab o Aflibercept). Estas inyecciones pueden ayudar a controlar el proceso de NVC pero no son del todo eficaces, requieren de repetidas inyecciones y hay controversia sobre los efectos secundarios asociados a ellas. Por todo ello, son numerosos los estudios que se están realizando con el fin de comprender el funcionamiento molecular de la patología y así encontrar nuevos tratamientos más eficaces y duraderos. Hoy en día, se está trabajando principalmente en el desarrollo de terapias celulares y terapias génicas. En respuesta a los problemas mencionados, proponemos el uso de una nueva terapia génica y celular como posible tratamiento de la DMAE húmeda. Este tratamiento consiste en la inyección subretiana de células primarias de epitelio pigmentado de la retina (EPR) o de iris transfectadas para producir PEDF mediante el sistema de transfección no viral de la Sleeping Beauty hiperactiva (SB100X). Este sistema permite insertar de forma eficaz y extremadamente segura el gen a estudiar dentro del genoma de las células, y así producirlo de forma prolongada. Se ha planteado el uso del PEDF como molécula antiangiogénica por ser uno de los principales factores antiangiogénicos producidos en el ojo de forma natural. Para evaluar la validez de este tratamiento hemos realizado ensayos in vitro e in vivo. En los ensayo in vitro se demostró que las células primarias tanto de iris como EPR se transfectaban eficazmente y eran capaces de producir PEDF de forma sostenida en el tiempo. Además, la inyección de estas células en ratas Brown Norway mostró que eran capaces de sobrevivir y producir el gen de interés estando localizadas en el espacio subretinianol durante al menos 4 meses, tiempo superior al intervalo entre inyecciones de los tratamientos actuales. Además, realizamos un ensayo de eficacia con el que verificar la validez de la terapia en la reducción de la NVC. Para ello, empleamos un modelo de NVC inducida por láser en ratas y determinamos el tamaño de las lesiones y la expresión de diversas moléculas. Este ensayo mostró que el PEDF producido por las células era capaz de reducir el área de lesión en los ojos tratados tanto con células de iris como de EPR. Se probaron dos dosis mostrando una mayor eficacia la dosis de células más elevada. Los ensayos bioquímicos de expresión de PEDF, VEGF y metaloproteinasas de matriz corroboraron los resultados obtenidos con las mediciones de las áreas de NVC ya que los grupos que presentaron una mayor reducción se correspondían con los que presentaban un estado antiangiogénico más favorable. Por todo ello, este estudio ha demostrado la eficacia de la novedosa combinación de terapia génica y celular mediante la inyección subretiana de células primarias de iris y EPR transfectadas con PEDF empleando el sistema no viral SB100X como posible tratamiento frente a la DMAE húmeda, siendo necesarios futuros estudios para confirmar su validez y aplicabilidad clínica.