Desarrollo de vacunas recombinantes específicas frente a infecciones producidas por Brucella ovis

Résumé

[ES] Brucella ovis causa epididimitis contagiosa en ganado ovino, una enfermedad infecciosa que origina cuantiosas pérdidas económicas en el sector ganadero. En la actualidad no existe una vacuna disponible que sea específica frente a esta especie, pero la cepa lisa atenuada B. melitensis Rev1, que se utiliza el control de las infecciones producidas por B. melitensis en el ganado ovino y caprino, confiere protección heteróloga y se considera la mejor vacuna disponible frente a la brucelosis causada por la especie naturalmente rugosa B. ovis. Sin embargo, además de otros inconvenientes, esta vacuna induce anticuerpos frente al lipopolisacárido en fase lisa (S-LPS) que es el principal antígeno en las pruebas serológicas empleadas actualmente en el diagnóstico de la brucelosis causada por especies lisas, por lo que su uso está prohibido en países donde las infecciones por B. melitensis se consideran erradicadas. Por ello, el desarrollo de una vacuna específica frente a B. ovis presenta gran interés y, considerando, que las vacunas más eficaces para la prevención de infecciones causadas por cepas lisas de las especies B. melitensis y B. abortus están constituidas por cepas vivas atenuadas, cabe esperar que la mejor estrategia para el desarrollo de una vacuna específica frente a B. ovis se base en una cepa atenuada homóloga. Considerando lo expuesto, los objetivos generales de esta tesis fueron dos; analizar la implicación en la virulencia de B. ovis de distintos genes relacionados con la ME y la virulencia de cepas lisas de Brucella spp. con la doble finalidad de ahondar en el conocimiento de los mecanismos de virulencia de B. ovis e incrementar la colección de mutantes atenuados disponibles en el laboratorio y, evaluar el interés de un panel mutantes atenuados derivados de B. ovis PA como vacunas vivas para la profilaxis de infecciones causadas por B. ovis. Los resultados obtenidos demostraron que, en las condiciones de trabajo empleadas, los genes bvrR, bvrS y omp16 son esenciales para el crecimiento in vitro de B. ovis PA, mientras que los genes omp10 y omp19 no son esenciales para la virulencia de B. ovis PA en modelo murino, aunque están relacionados con la estabilidad de su ME y con la supervivencia de la bacteria en el interior de macrófagos J774.A1 durante las primeras 24 horas post-infección. Por otra parte, se evidenció que la doble mutación en los genes relacionados con la ME omp31 y bacA, que individualmente no están implicados en la virulencia de B. ovis PA, no produce una atenuación en virulencia y confiere a B. ovis PA un fenotipo muy similar al mostrado por la cepa mutante simple B. ovis ¿omp31. Respecto a la evaluación en modelo murino de los mutantes atenuados derivados de B. ovis PA como vacunas vivas, los mutantes ¿omp25d y ¿omp22, en una única dosis, y sin la necesidad de ser administrados de forma conjunta con adyuvantes, desencadenaron una respuesta inmune tanto de naturaleza humoral como celular que se evidenció, principalmente, por un alto título de anticuerpos de la clase IgG en suero y por una mayor y más rápida secreción, tras un segundo estímulo con B. ovis, de IL1¿, TNF¿ e IFN¿. Además, ambos mutantes fueron capaces de conferir protección - frente a B. ovis en modelo murino - en niveles equivalentes a los conferidos por la vacuna clásica a B. melitensis Rev1. Por todo ello y considerando los inconvenientes de la vacunación con B. melitensis Rev1, ambas cepas mutantes derivadas de B. ovis PA constituyen una alternativa prometedora como vacunas homólogas específicas contra la epididimitis contagiosa del carneros ocasionada por B. ovis y merecen ser evaluadas como vacunas en su hospedador natural.¿