Caracterización funcional del gen ehs1+ de schizosaccharomyces pombe

Abstract

El mutante ehs-1 fue aislado en una búsqueda de mutantes hipersensibles a Equinocandina y Calcofluor, dos antifúngicos que interfieren en la biosíntesis de la pared celular.ehs1-1 presenta además, un fenotipo de lisis a altas temperaturas que se corrige en presencia de estabilizadores osmóticos.ehs1-1, mayor sensibilidad al tratamiento con enzimas que degradan la pared celular y una pequeña descompensación en los polímeros que componen la pared celular. La proteína Ehs1p muestra un cierto parecido con Mid1p de S.cerevisiae, una proteína asociada a la membrana plasmática y es necesaria para la toma de calcio durante el proceso de conjugación. Basándonos en este parecido hemos visto que ehs1+ está implicado en la acumulación intracelular de calcio. Un incremento de la concentración externa de calcio suprime todos los fenotipos asociados a la falta del gen ehs1+, sugiriendo que los defectos asociados a la integridad celular en el mutante ehs1+ estarían relacionados con defectos en el metabolismo del calcio. En S.cerevisiae se ha propuesto que Mid1p junto con la proteína Cch1p formarían parte de un canal de calcio. Cch1p presenta un gran parecido con las subunidades alfa1 de diferentes canales de calcio dependientes de voltaje identificados en células de mamíferos. Nosotros hemos identificado una proteína similar a Cch1p en S.pombe (Spcch1p). Curiosamente los mutantes ehs1*, spcch1* y ehs1*spcch1* muestran el mismo grado de sensibilidad a Equinocandina lo que sugiere que Ehs1p y Spcch1p podrían formar parte de un canal de calcio que se hallaría conservado a lo largo de la evolución. Hemos observado una interacción génica entre ehs1+ y pck2+ un homólogo a PKC de mamíferos.pck2+ suprime todos los fenotipos asociados al mutante ehs1-1. Nuestros resultados sugieren que Ehs1p formarían parte de un canal de calcio que participaría en el mantenimiento de la integridad celular junto con la proteína quinasa Pck2p.