Produccion de albúmina humana en tubérculos de plantas transgénicas de patata ("Solanum tuberosum L.")

Zusammenfassung

La albúmina humana (HSA) es la proteína sérica más utilizada en el mundo, estimándose unas necesidades mundiales de aproximadamente 500 toneladas por año. La albúmina comercial se obtiene básicamente de plasma humano, por lo que la producción de albúmina recombinante es muy atractiva, tanto para eliminar el riesgo de trasmision de enfermedades, como para reducir el consumo de sangre procedente de bancos. La producción de proteínas recombinantes en plantas transgénicas ofrece una gran flexibilidad en cuanto al tamaño de producción, así como unos costes de implantación bajos. Además, presenta ventajas como el procesamiento eucariotico de la proteína recombinante y la bioseguridad. Para expresar albúmina humana en tubérculos de plantas transgénicas de patata, la estrategia seguida consistió en producir la secuencia del cDNA de la HSA madura y clonarla bajo el control transcripcional de un promotor específico de tubérculo (promotor B33 de patatina). El extremo amino de la albúmina recombinante se fusionó a un péptido señal tambien de tubérculo (inhibidor de proteasa II), para que se procese correctamente dicha fusión in vivo y de lugar a la albúmina recombinante madura. La transformación se realizó mediante Agrobacterium tumefaciens a partir de hojas de patata cv. Desiree, Kennebec y Pasc58, y se verificó la inserción del transgen mediante screening por PCR y Southern. La expresión del mismo se analizó mediante Northern blot en tubérculos procedentes de plantas cultivadas en invernadero. Los niveles de producción de albúmina recombinante se analizaron mediante Western blot, y se cuantificaron por ELISA. Los valores máximos de albúmina recombinante acumulada en los tubérculos de dichas transgénicas fueron la albúmina humana. Se demostro la localización apoplástica de la HSAr en hojas de plantas transgénicas de patata, induciendo su expresión con sacarosa. Así mismo, la albúmina recombinante producida en tubérculos se purifico me