Transdiferenciación de fibroblastos a hepatocitos mediante reprogramación celularpapel de Gata4 en el bloqueo de la reprogramación de células somáticas

Résumé

En esta tesis doctoral se muestra la conversión directa de fibroblastos embrionarios de ratón a células con morfología y fenotipo similares al hepatocito mediante la expresión retroviral de seis factores de transcripción hepáticos, Hhex, Gata4, Foxa2, HNF4? HNF1? y HNF6. Los fibroblastos infectados mantenidos durante 3-4 semanas en cultivo adquieren una morfología epitelial y expresan genes típicamente hepáticos como Albumina, Cyp7a1, Tat o Slc10a1 a niveles próximos al hepatocito. Durante la manipulación de los fibroblastos mediante la expresión de los factores de transcripción ya mencionados, observamos que el factor de transcripción Gata4 es capaz de bloquear la reprogramación a células pluripotentes inducidas. La expresión de Gata4 junto con los factores de reprogramación a pluripotencia, Oct4, Klf4, Sox2 y c-Myc, impide la inducción de Nanog en los fibroblastos en reprogramación. La ausencia de Nanog conlleva la imposibilidad de transitar desde la fase de iniciación a la fase de maduración de la reprogramación. En esta tesis describimos como Gata4 es capaz de unirse directamente a un regulador distal (ECR IV) del gen Nanog e inhibir su transcripción, causando un bloqueo permanente en la reprogramación a pluripotencia. Los resultados de esta tesis no solo tienen implicaciones en los estudios de la reprogramación sino también en el descifrado de las redes transcripcionales que permiten la segregación del endodermo primitivo de las células de la masa celular interna durante el desarrollo embrionario.