Caracterización genética y genómica del mieloma múltiple

Resumen

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA Y GENÓMICA DEL MIELOMA MÚLTIPLE Resumen: El mieloma múltiple (MM) es una neoplasia de células plasmáticas con una gran variabilidad en las características clínicas, respuesta al tratamiento y supervivencia. Esta neoplasia se caracteriza por la acumulación de células plasmáticas malignas en la médula ósea, la secreción de inmunoglobulina monoclonal y la presencia de lesiones óseas que continúa siendo una enfermedad incurable. Existen dos aspectos importantes en la patogénesis del mieloma múltiple. El primero es la estrecha interacción de las células de mieloma con las células del estroma de la médula ósea, la cual es necesaria para la supervivencia, crecimiento y diferenciación de las células plasmáticas. En segundo lugar, hay que reconocer que las alteraciones genéticas están virtualmente presentes en todos los mielomas. Estas alteraciones genéticas pueden consistir tanto en translocaciones cromosómicas equilibradas, que implican a los genes de Ig y a un oncogén, como en ganancias y/o pérdidas de cromosomas o regiones cromosómicas específicas, o como en la combinación de ambos tipos de alteraciones. Cada vez aumenta más el conocimiento sobre el papel que juegan las translocaciones en mieloma, sin embargo se conoce menos del papel que juegan las ganancias y las pérdidas. Las ganancias o amplificaciones genómicas son eventos de especial interés si están asociados a sobre-expresión de un gen o algunos genes que están situados en esa región. Estos eventos se han observado frecuentemente en distintos tipos de tumores y han sido utilizados para el diseño de nuevos agentes terapéuticos. En primer lugar caracterizamos nueve líneas celulares de mieloma mediante hibridación in situ con fluorescencia, hibridación genómica comparada y arrays de ADNc para la identificación de las variaciones en el número de copias (aCGH) y el análisis de los perfiles de expresión génica. Después de la caracterización de las translocaciones de inmunoglobulinas, realizamos los estudios de expresión génica. Con los aCGH establecimos las regiones de ganancia y pérdida y enfocamos el estudio en los cinco cromosomas (1, 7, 8,11 y 18) que estaban recurrentemente ganados y/o amplificados. Encontramos 13 regiones de ganancia/amplificación en estos cromosomas e identificamos 60 genes recurrentemente sobre-expresados dentro de estas regiones. 25 (42%) de estos genes únicamente aparecían sobre-expresados en las líneas celulares que presentaban ganancia/amplificación, más aún, encontramos seis genes que presentaban una asociación significativa entre la amplificación y la sobre-expresión, Validamos tres genes candidatos, C-MYC, MALT1 y BCL2, mediante técnicas alternativas (FISH y qRT-PCR) y esta validación permitió identificar que los genes MALT1 y BCL2, localizados en 18q21, se encuentran en el mismo amplicón y que se sobre-expresan simultáneamente. También hemos llevado a cabo un análisis de los perfiles genómicos de muestras primarias de MM con arrays de CGH de alta resolución, que contiene más de 40000 sondas. Se analizaron 26 muestras primarias enriquecidas en células plasmáticas con el marcador de superficie CD-138. A pesar de que la mayoría de las muestras mostraron un cariotipo normal al diagnóstico, nuestra estrategia permitió la identificación de variaciones en el número de copias en todas las muestras analizadas. Además identificamos 68 regiones mínimas comunes de ganancias y pérdidas para los análisis posteriores. El análisis de agrupamiento no supervisado fue capaz de separar los casos hiperdiploides de los no-hiperdiploides, más aún identificó dos subgrupos de mielomas hiperdiploides en función de la presencia de ganancias en el cromosoma 7. Además, identificamos una duplicación en el cromosoma X (Xq21-qter) en el 20% de los casos y demostramos mediante FISH y SKY que esta duplicación es el resultado de translocaciones no equilibradas. Por último y de gran interés, hemos identificado amplificaciones y deleciones homocigóticas que incluyen genes de interés en la biología del cáncer.