Distribución y expresión de beta-lactamasas cromosómicas en yersinia enterocolítica

Resumen

A DIFERENCIA DE LA MAYORIA DE ENTEROBACTERIAS Y. ENTEROCOLITICA CONTIENE DOS GENES EN SU CROMOSOMA QUE CODIFICAN SENDAS BETALACTAMASAS. EL PRIMER GEN AL QUE LLAMAMOS BLAA CODIFICA UNA BETALACTAMASA DE LA CLASE A SIMILAR A TEM. EL SEGUNDO GEN LO LLAMAMOS AMPC Y CODIFICA UNA CEFALOSPORINASA CROMOSOCA TIPICA. ES INDUCIBLE Y VA ACOMPAÑADA DE UN GEN REGULADOR AMPR. AMBOS GENES HAN SIDO CLONADOS Y SECUENCIADOS EN NUESTRO LABORATORIO. PARTIENDO DE UNA COLECCION DE CEPAS PERTENECIENTES A DIFERENTES BIOTIPOS Y SEROTIPOS DE Y. ENTEROCOLITICA HEMOS ENCONTRADO QUE HABITUALMENTE SOLO SE EXPRESA UNO DE LOS DOS GENES MIENTRAS QUE EL OTRO PERMANECE INACTIVO UTILIZANDO SONDAS CONSTRUIDAS A PARTIR DE GENES ACTIVOS HEMOS CLONADO UN GEN BLAA INCACTIVO DE LA CEPA IP97 Y UN GEN AMPC INACTIVO DE LA CEPA Y 56 EL GEN BLA AIP97 PRESENTA UNA DELECION DE 51BP Y DA LUGAR A UNA PROTEINA INACTIVA MIENTRAS QUE EL GEN AMPCY56 MUESTRA DOS MUTACIONES PUNTUALES DE LAS QUE SOLO UNA PRODUCE UN CAMBIO DE UN AMINOACIDO EN UNA REGION NO CONSERVADA. SE DESCONOCE EL EFECTO DE ESTA MUTACION EN LA ESTRUCTURA DE LA PROTEINA PERO NO HAY DUDAS RESPECTO A QUE ESTA MUTACION ES LA CAUSA DE LA FALTA DE ACTIVIDAD DEL PRODUCTO AMPCY56. HEMOS EXAMINADO DE LA MISMA FORMA UN GRUPO DE CEPAS AISLADAS EN CANADA Y AUSTRALIA CON UN ALELO AMPC INACTIVO. POR SECUENCIACION HEMOS IDENTIFICADO EN ELLAS UNA DELECION DE 2PB QUE DA LUGAR A UN CODON DE TERMINACION PREMATURA. POR RECOMBINACION HOMOLOGA HEMOS CONSTRUIDO UN DERIVADO DE IP97 CON AMBAS BETA LACTAMASAS ACTIVAS. TRAS SUBCULTIVOS REPETIDOS HEMOS PODIDO AISLAR MUTANTES ESPONTANEOS CON ALGUNA DE LAS BETA LACTAMASAS INACTIVAS. ESTOS MUTANTES HAN SIDO ANALIZADOS PERO NO PRESENTABAN LAS MUTACIONES IDENTIFICADAS PREVIAMENTE. LAS MUTACIONES NO CONLLEVAN REORGANIZACIONES IMPORTANTES DEL GENOMA Y POSIBLEMENTE SE TRATE DE MUTACIONES PUNTUALES QUE NO HEMOS IDENTIFICADO. CONCLUIMOS QUE LA PRESENCIA SIMULTANEA DE DOS BETA LACTAMASAS EN Y, ENT