Expresión y efectos del factor de crecimiento neural en el microambiente tumoral de la metástasis hepática del cáncer de colon

Résumé

El NGF juega un papel importante en los procesos de reparación tisular, fibrogénesis, y cáncer. En el hígado, los hepatocitos producen NGF, contribuyendo a la regulación funcional de las células sinusoidales estrelladas, y al aumento de concentración en sangre periférica de pacientes con hepatocarcinoma sobre cirrosis. En este proyecto se estudió la expresión e implicación funcional del NGF durante la metástasis hepática del cáncer de colon. Los objetivos generales fueron: 1) estudiar la expresión de NGF y sus receptores en el hígado con metástasis de pacientes con cáncer de colon avanzado; y 2) verificar experimentalmente la expresión e implicación funcional del NGF y sus receptores durante la metástasis hepática. Los resultados obtenidos demostraron que el estroma tumoral, pero no las células metastáticas expresaron NGF. En cambio, el receptor de NGF, TrkA, lo expresaron tanto células metastáticas como estromales, y el receptor de neurotrofinas p75, solo células estromales pero no tumorales. La expresión estromal de NGF no se correlacionó con la proliferación celular en la metástasis hepática, pero sí con la expresión de alfa actina del músculo liso, indicando que producción de NGF y presencia de miofibroblastos estuvieron relacionados. In vitro, las células de cáncer de colon murino (51b y C26) y humano (HT-29) expresaron TrkA, y algo p75 en el caso de los tumores murinos, y en concordancia con los resultados in situ, su respuesta a NGF recombinante no alteró su proliferación, pero si incrementó su migración en el caso del cáncer de colon 51b. Las metástasis hepáticas experimentales presentaron el mismo patrón de expresión de NGF y sus receptores que en las de pacientes con cáncer de colon, lo que validó el uso para estudiar el NGF en la metástasis hepática. La expresión de NGF se produjo en células hepáticas, pero no tumorales, desde la fase avascular de la micrometástasis intralobulillar. Más tarde, los hepatocitos y células sinusoidales estrelladas asociados a metástasis presentaron una alta expresión de NGF, que se co-localizó con la de alfa actina de músculo liso, y que conllevó un aumento de NGF en sangre hepática. Las células estrelladas en cultivo primario incrementaron su migración quimiotáctica y su secreción de NGF en respuesta al medio condicionado del cáncer de colon 51b, pero no del C26. También incrementaron su expresión de TrkA, mientras que disminuyeron la de p75, y los anticuerpos anti-NGF inhibieron la migración de las células estrelladas inducida por factores proangiogénicos, como VEGF e ICAM-1 soluble. Las células estrelladas hepáticas, pero no las células tumorales, produjeron factores estimulantes de la secreción de NGF para hepatocitos, hecho que coincidió con la activación de su transdiferenciación epitelio-mesenquimal por TGFbeta. Este mecanismo se confirmó en hepatocitos en cultivo primario, donde TGFbeta estimuló la expresión génica de NGF y de SNAIL, e inhibió la de cadherina E. En conclusión, NGF es una molécula a tener en cuenta en el microambiente de la metástasis hepática del cáncer de colon, producida por células estrelladas hepáticas activadas por células tumorales de las micrometástasis avasculares y, más tarde, por hepatocitos perimetastáticos en estado de transición epitelio-mesenquimal, inducida por TGFbeta de las propias células estrelladas. A su vez, el NGF asociado a la metástasis actúa sobre las células tumorales y hepáticas con expresión de TrkA, estimulando su migración, lo que podría contribuir al desarrollo de la metástasis.