Compartimentación celular y acoplamiento funcional a proteínas g heterotriméricas del receptor cannabinoide cb1 en corteza cerebral de mamíferos (rata y humano). regulación en un modelo animal de desa

Resumen

En la presente tesis doctoral se ha estudiado la compartimentación celular y el acoplamiento funcional a proteínas G heterotriméricas del receptor cannabinoide CB1 en la corteza cerebral de mamíferos (rata y humano) mediante técnicas de inmunodetección con anticuerpos específicos (inmunofluorescencia, inmunohistoquimia y Western blot) y técnicas de fijación de radioligandos y de estimulación de la fijación del nucleótido [35S]GTP¿S. Nuestros resultados demuestran la localización del receptor CB1 en balsas lipídicas (lipid rafts) y la presencia mayoritaria de las isoformas ¿o y ¿i3 de la familia de proteínas G¿i/o. Asimismo, demostramos cómo la alteración del colesterol impacta en la capacidad de acoplamiento del receptor a las proteínas G¿i/o, resultando en un aumento en la eficacia de la respuesta (Emax). Por otro lado, a pesar de las evidencias presentadas en esta tesis doctoral, tanto farmacológicas como bioquímicas, que sugieren la expresión del receptor CB1 en el núcleo celular, la funcionalidad observada en las preparaciones enriquecidas en elementos nucleares no puede atribuirse ni a una expresión funcional de receptores CB1 en núcleos neuronales ni en mitocondrias. Concluimos, por tanto, que el anticuerpo utilizado (CB1-Go-CB1-Af450-1, Frontier Science) parece reconocer de forma específica tanto el receptor CB1 como una proteína adicional de localización nuclear. Por último, dado el gran número de evidencias, tanto anatómicas como farmacológicas, que relacionan al receptor CB1 con la respuesta al estrés y el control de la homeostasis emocional, se ha estudiado la expresión y funcionalidad del receptor en secciones tisulares y en preparaciones de membrana obtenidas a partir de corteza cerebral y áreas límbicas relacionadas en la rata Zucker obesa, utilizada como modelo animal de desadaptación crónica al estrés. Nuestros resultados demuestran un aumento de la expresión y funcionalidad del receptor CB1 con respecto al fenotipo delgado, que se expresa de forma región-selectiva en la corteza prefrontal medial, no habiendo diferencias ni en el hipocampo ni en la amígdala. De forma paralela, el estudio de la influencia del ritmo circadiano demuestra un aumento en el nivel de expresión del receptor CB1 presente en la amígdala únicamente en ratas Zucker de fenotipo delgado sacrificadas en el momento de máxima secreción de glucocorticoides (tarde).