Desarrollo y caracterización de un modelo de ratón para el estudio de la infección por el virus de la hepatitis delta

Resumen

Antecedentes y objetivos: El virus de la hepatitis Delta (VHD) es el más peculiar de los virus de hepatitis y también el más virulento. El VHD depende de los antígenos de superficie del virus de la hepatitis B (VHB) para formar nuevos viriones. Este virus tiene características biológicas únicas y muchos aspectos de su ciclo replicativo siguen sin ser esclarecidos. Actualmente no existen medicamentos disponibles para el tratamiento específico de esta infección. La falta de modelos animales realmente manipulables para la infección por el VHD ha obstaculizado su estudio y el diseño de nuevas terapias. El VHD no es capaz de infectar de manera eficiente los hepatocitos de ratón debido, principalmente, a restricciones moleculares presentes en el receptor de membrana responsable de la entrada. Nuestra hipótesis de trabajo plantea salvar esta barrera utilizando los vectores recombinantes basados en Virus Adeno Asociado (rVAA), capaces de transducir eficientemente los hepatocitos de ratón, como vectores lanzadera para vehiculizar y transferir el genoma del VHD al núcleo de los hepatocitos. El objetivo de esta tesis ha sido el desarrollo y la caracterización de un nuevo modelo animal en ratón para la infección crónica por el VHD utilizando los rVAA como vectores lanzaderas. Métodos: Para el desarrollo de esta tesis se construyeron dos vectores basados en rVAA, uno que contenía una construcción recombinante del VHB denominada VHB1.3X (rVAA-VHB1.3X) y otro que contenía una construcción recombinante del VHD, denominada VHD1.2X (rVAA-VHD1.2X). Se emplearon ratones C57BL/6 y C57BL/6 Rag1 -/- para establecer los modelos de co-infección y super-infección de los VHB/VHD. A diferentes tiempos se analizó: la formación de genomas virales, la expresión de antígenos virales tanto en el suero como en el hígado, la formación de partículas infecciosas del VHD y los niveles de transaminasas en suero. Resultados: La inyección del vector rVAA-VHB1.3X en los ratones resultó en la expresión sostenida de los antígenos del VHB, antígeno de superficie y antígeno del core. La co-infección y super-infección de estos animales con el vector rVAA-VHD1.2X, pero no con un vector rVAA control, indujo una reducción dramática de la carga viral del VHB y fue acompañado por una viremia sostenida del VHD con una marcada elevación de transaminasas séricas. Las partículas virales producidas in vivo del VHD en ambos modelos animales, co-infección y super-infección, presentaron capacidad infectiva. Conclusiones: Hemos desarrollado un modelo de ratón para el estudio de la infección crónica por el VHD parecida a la infección en humanos. Este modelo es una herramienta útil para el estudio de ciclo viral del VHD, mecanismos moleculares implicados en su patogenicidad y el desarrollo de nuevos antivirales.