Efecto de la inhibición del tgf-beta en neovascularización coroidea inducida por láser diodo-péptidos p17 y p144

Resumen

El factor de crecimiento transformante beta (TGF-β) es un potente inductor de la angiogénesis a través de la hipersecreción de VEGF. Dado que el VEGF es el principal factor implicado en la neovascularización coroidea (NVC), un bloqueo selectivo del TGF-β puede modificar el desarrollo de estas lesiones afectando a diversas citoquinas implicadas en este proceso.Este trabajo pretende evaluar el efecto de la inhibición del TGF-β con dos péptidos denominados P17 y P144 en un modelo de NVC inducida por láser diodo (Li-NVC) en ratas pigmentadas Long Evans. Estos péptidos han demostrado un fuerte efecto inhibitorio sobre el TGF-β y la angiogénesis TGF-β-dependiente en distintos modelos animales. Este efecto ha sido evaluado en 2 diseños experimentales, sobre la inducción de lesiones (48h post-laser) y sobre lesiones precoces de NVC (16 días post-laser). En el estudio sobre inducción de lesiones se incluyeron 61 ratas Long Evans a las que se les aplicó el modelo de Li-NVC. 48 h despues se administraron los tratamientos. El grupo de control intravenoso y el grupo P17 intravenoso recibieron 5 dosis (0.2 ml cada 72 h) de vehículo y P17 (1 mg/ml) respectivamente. 4 grupos recibieron tratamiento intravítreo con P17 a baja (1 mg/ml) y alta dosis (20 mg/ml) y P144 a baja (1 mg/ml) y alta dosis (3 mg/ml), mientras el ojo contralateral fue inyectado con vehículo. Se realizó angiofluoresceingrafía (AGF) de forma semanal durante 4 semanas. Tras el sacrificio, los niveles de proteína de VEGF, TGF-β y PDGF se determinaron por ELISA en homogeneizados de EPR y retina. El área de difusión media medida en pixels fue significativamente menor a la 2ª y 4ª semana con el P17 intravenoso y desde la 2ª semana con el P17 intravítreo a dosis alta, mientras que el P144 mostró un área menor en todos los tiempos. El P17 intravítreo mostró menores niveles de TGF-β en retina y PDGF en EPR a dosis baja, mientras que a dosis alta mostró niveles menores en VEGF y TGF-β en retina y EPR, así como PDGF en EPR. El P144 mostró niveles menores de VEGF en retina a dosis alta. En el estudio sobre lesiones precoces de NVC se incluyeron 71 ratas. 14 días tras el laser se realizó una AGF control y 48 horas después se administraron los tratamientos. 3 grupos endovenosos y 3 grupos intravítreos fueron incluidos, control (vehículo), P17 (1 mg/ml) y P144 (1 mg/ml); y P17 (20 mg/ml), P144 (3 mg/ml) y mezcla de ambos péptidos P17 y P144 (20 mg/ml y 3 mg/ml). Se realizó AGF semanal durante 4 semanas y se enuclearon los ojos para estudio bioquímico. Se determinó la expresión génica mediante PCR a tiempo real para los genes VEGF, TGF-β, COX-2, IGF-1, PAI-1, IL-6, MMP-2, MMP-9 y TNF-, los niveles de proteína de VEGF y p-SMAD2 por Western Blot, y los niveles de actividad enzimática de MMP-2 mediante zimografía en gel de gelatina. Se observó disminución significativa en el área de difusión media desde la 3ª semana en los grupos P17 y P144 intravítreo, y desde la 2ª semana en el grupo de mezcla intravítrea. Los niveles de expresión génica fueron menores en los genes VEGF y COX-2 en los grupos P17 y P144 endovenoso, VEGF en el grupo de mezcla intravítrea y MMP-2 en los grupos P17 y P144 intravítreo. Los niveles de proteína de VEGF fueron menores en los grupos P17 y P144 endovenosos e intravítreos, y los niveles de pSMAD2 fueron menores en los grupos P17 y P144 endovenosos y mezcla intravítrea. Los niveles de actividad de MMP-2 fueron significativamente menores para P17 y P144 endovenosos e intravítreos. Los hallazgos descritos en esta tesis sugieren un efecto marcado de los péptidos P17 y P144 sobre el VEGF mediante una vía alternativa a los tratamientos actuales. La inhibición adicional del TGF-β, PDGF, COX-2, MMP-2 y MMP-9 puede proporcionar un beneficio añadido a los fármacos anti-VEGF disponibles en la actualidad. Este es el 1er estudio dirigido a evaluar el efecto antiangiogénico de estos péptidos en un modelo animal de NVC.