Análisis molecular del control de la expresión del gen HKE6

Resumen

Se ha descrito que la expresión de la deshidrogenasa de 17beta-hidroxiesteroides tipo 8 (17-beta HSD tipo 8) está disminuida en modelos murinos de la forma autosómica recesiva del riñón poliquístico (ARPKD). Ya que el esclarecimiento del mecanismo de control de la expresión de esta enzima podría ayudar a entender los desequilibrios que se producen en la ARPKD, en este trabajo hemos analizado el promotor del gen de la 17beta-HSD tipo8 humana, hHSD17B8, también llamado HKE6. La determinación del sitio CAP se ha realizado por primer extensión y ha mostrado dos sitios principales de inicio de la transcripción en las posiciones -30 y -154 del gen. El extremos 5' del gen, que carece de caja TATA, pero posee numerosos posibles sitios de unión para factores de transcripción, tiene actividad promotora en células HepG2 y CV-1. Aunque esta actividad es más eficaz en las células HepG2, la región comprendida entre los nucleótidos -75 y +36 del gen es suficiente para que se produzca la transcripción en ambos tipos celulares. Esta región contiene dos cajas CCAAT de las que al menos una, situada en la posición -44, es imprescindible para la transcripción del gen. En extractos proteicos nucleares de células HepG2 imprescindible para la transcripción del gen. En extractos proteico nucleares de células HepG2 ambas cajas CCAAT interaccionan de forma específica con el factor de transcripción C/EBPbeta. A pesar de ello, el tratamiento con IL-6 no modifica la actividad del promotor en células HepG2. En estas células la región comprendida entre los nucleótidos -260 y -75 del gen, que contiene posibles elementos de unión para los factores de transcripción Sp1, SREBP-1 y Ap1, se comporta como un enhancer. Aunque el 25-hidroxicolesterol no modifica la actividad del promtor en células HepG2, el 17beta-estradiol incrementa dicha actividad. Este incremento, que se manifiesta incluso en el promotor mínimo se produce a través de las