Análisis molecular del control de la expresión del receptor de retinoides humano RXR beta

Resumen

En este trabajo se describe el clonado y caracterización de la región 5' del gen del receptor de retinoides humano hRXRb. El análisis del extremo 5' del gen ha revelado que este se encuentra en una región del genoma rica en G y C que contiene posibles sitios de unión para factores de transcripción como Sp1, AP-1, NFkB, SF-1, c-Ets o CREBP, así como posibles elementos de respuesta a la hormona tiroidea, el ácido retinoico y la vitamina D, pero no contiene cajas TAT ni CAAT. La actividad transcripcional del extremo 5' del gen se ha analizado mediante experimentos de expresión transitoria en células HeLa y CV-1. Con este fin se han construido 10 plásmidos quiméricos, denominados pPRXRVLuc1 a pPRXRBLuc13, en los que fragmentos de diferente longitud de la posible región promotora del hRXRb se han insertado en posición 5' con respecto al gen de la luciferasa. La transfección de estos plásmidos en las líneas celulares indicadas ha mostrado que esta región tiene actividad promotora y que los elementos cis-reguladores localizados en la región -302 a + 51 del gen son necesarios y suficientes para el desarrollo de esta actividad. Este fragmento rico en G y C, contiene dos cajas GC que interaccionan específicamente con el factor de transcripción Sp1 in vitro y se requieren para alcanzar valores de expresión elevados. El TNF-a disminuye en células HeLa entre 50-60% la actividad transcripcional de todas las construcciones pPRXRBLuc analizadas excepto pPRXRBLuc12. Esta acción, que debe realizarse a través de un elemento cis-regulador localizado en la región -302 a -71 del gen, está mediada por la p38 MAPK. El ácido 9-cis-retinoico incrementa la actividad transcripcional de las quimeras pPRXRBLuc en la línea celular CV1. Este aumento es máximo en la construcción pPRXRBLuc12, que contiene únicamente la secuencia -71 a +51 del gen HRXRV y no contiene ningún posible RARE. Sin embargo, la hormona tiroidea, a pesar de inc