Test de sensibilidad a antibióticos para staphylococcus aureus formadores de biofilms

Zusammenfassung

En el presente trabajo de Tesis se describe el desarrollo de un nuevo test que permite conocer de modo más eficaz la sensibilidad de Staphylococcus aureus a diferentes antibióticos, cuando las bacterias crecen adherida a una superficie y formando biofilms. El test desarrollado utiliza la bioluminiscencia como técnica para determinar la viabilidad bacteriana. Esta técnica, se ajusta a las condiciones del estudio y a la bacteria considerada (S. aureus), en el capítulo 1 de la tesis. La bioluminiscencia se utiliza en la cuantificación bacteriana para discriminar aquellos biomateriales empleados en cirugía ortopédica que favorecen la colonización bacteriana (aleaciones de acero y titanio, Capítulo 2). En este capítulo se describe la evolución de la adherencia a biomateriales en función del tiempo y la cepa, y se demuestra una mayor adherencia cuando las bacterias son formadoras de exopolisacáridos. En el capítulo tercero se describe la metodología empleada para la obtención de biofilms bacterianos comparando diversos soportes, (poliestireno, gelatina, poli-L-lisina y placas preparadas para cultivos celulares), se concluye qe el material más adecuado para el desarrollo de biofilms son las placas de poliestireno con un pretratamiento comercial para favorecer los cultivos celulares. Sobre estas placas, en el capítulo cuarto se desarrolla el test de antibióticos, ensayando la efectividad de 15 antimicrobianos sobre biofilms de 6, 24 y 48 horas de edad, y observando que varios de los antibióticos que eran efectivos en antibiogramas convencionales (microdilución en medio líquido), resultaban ineficaces para eliminar biofilms bacterianos, (amikacina, estreptomicina, gentamicina, tobramicina, eritromicina, clindamicina, ciprofloxacina, ofloxacina). El efecto de los antibióticos sobre el biofilm se visualizó por microscopía electrónica. Con tres antibióticos ensayados in vitro, cefuroxima, tobramicina y vancomicina