Células endoteliales circulantes como marcador subrogado de evolución de pacientes afectos de policitemia vera y mielofibrosis

Resumen

Las Neoplasias Mieloproliferativas Crónicas Filadelfia negativas (NMPc Phi-) clásicas: Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Esencial y Mielofibrosis (MF), son desórdenes hematopoyéticos clonales caracterizados por la hiperproducción de una o más líneas celulares hematológicas. La base sobre la que se fundamenta este trabajo es la proliferación endotelial encontrada en los pacientes con NMPC Phi-neg. Como consecuencia de un evento molecular precoz, los progenitores hematopoyéticos proliferan y liberan factores de crecimiento y citoquinas dentro del microambiente medular que provocan fibrosis y un desequilibrio en los nichos.Esto favorece aún más la proliferación de las células progenitoras tanto hematopoyéticas, como mesenquimales y endoteliales y su movilización hacia sangre periférica.Estos precursores migrados son responsables de la hematopoyesis extramedular de localización hepatoesplénica, que aparece en estadios avanzados. Los objetivos fueron: 1. Cuantificar la presencia de CEC empleando el sistema CellSearch® en pacientes en diferentes estadios evolutivos de una NMPC 2. Evaluar en cada grupo de pacientes, la presencia en sangre periférica de citoquinas con valor pronóstico y la presencia de células progenitoras endoteliales identificadas mediante citometría de flujo y correlacionar estos parámetros con las características clínicas y con el recuento de CEC previo Se estudiaron 5 grupos de sujetos:10 voluntarios sanos(controles),10 pacientes con PV inferior a 10 años de evolución, 10 con PV de más de 10 años de evolución, 9 pacientes con Mielofibrosis de bajo riesgo y 10 con MF alto riesgo. A todos los sujetos se les realizaron las siguientes determinaciones: Cuantificación de CEC (mediante Cell-Search®), citometría de flujo: análisis de la población CD133+CD34+KDR+ y determinación de biomarcadores: empleando arrays específicos para determinar citoquinas pro y anti-inflamatorias. El sistema “Cell-Search” es la única estrategia automatizada y estandarizada para la identificación de CEC. Se identifican como CEC aquellas células seleccionadas inmuno-magnéticamente CD146 positivas y que al mismo tiempo, colocalizan CD105-PE y DAPI, siendo el marcaje para CD45 negativo. Se observó un incremento gradual en la cifra de CEC entre los diferentes grupos, aunque el mayor salto cuantitativo en este valor se produjo dentro del grupo de pacientes afectos de mielofibrosis con DIPSS más elevados. Se encontraron diferencias muy significativas entre los distintos grupos al comparar los valores de CEC (con un valor de p<0.001). Los test Post-Hoc mostraron diferencias significativas entre el grupo control y los cuatro grupos de enfermedad todos ellos con valores de p muy significativos. Se realizaron curvas ROC para intentar estimar un punto de corte aproximado para valores de CEC con una posible utilidad clínica: En el primer análisis realizado (controles frente a pacientes) el punto de corte más adecuado se situó en una cifra absoluta de 16 CEC/4ml. En el segundo análisis, se realizó una agrupación de los pacientes diagnosticados de PV y de los pacientes diagnosticados de MF y se excluyó el grupo de controles. En este caso el punto de corte se corresponde con un valor absoluto de CEC de 81/4mL. La correlación positiva entre las cifras de CEC y las cifras de LDH, TGF-β e IL-6 es un dato muy valorable, a la vista de los diferentes estudios publicados en los que se menciona la importancia de estas citoquinas en la fisiopatología de las NMPC. Como conclusiones se destacan 2: 1. Los valores de CEC son significativamente mayores en los grupos de pacientes que en los controles. El punto de corte de 16 CEC/4mL presenta una sensibilidad del 97,4% y una especificidad del 99% para identificar a los pacientes 2. Los valores de CEC permiten también diferenciar a los pacientes con PV frente a los pacientes con MF, con una especificidad del 98,5% para un punto de corte de 81 CEC/4mL. Esto abre la puerta para una posible utilización clínica