Caracterización funcional del intercambiador de aminoácidos neutros humano asct1 expresado en oocitos de xenopus laevis

Abstract

La proteína ASCT1 es un transportador de aminoácidos neutros humano, que fu clonado a partir de cerebro humano en 1993. ASCT1 muestra las características funcionales descritas para el sistema ASC. Sin embargo, algunas de las características descirtas para dicho sistema no han sido comprobadas en ASCT1, por lo cual quedaban algunas cuestiones no resueltas cuya resolución ha sido el objetivo de esta tesis doctoral. Así hemos aclarado el papel del Na+ en el mecanismo de intercambio de aminoácidos mediado por ASCT1, donde funciona como un modulador alostérico bidireccionalmente contrasportado. Asimismo hemos demostrado la capacidad de ASCT1 para transportar activamente alanina, y mediar transporte de glutamato, el cual depende del valor de pH extracelular pero no de la concentración extracelular de Na+, al contrario de lo que ocurre con el transportador de alanina. Además, demostramos la capacidad de ASCT1 para transportar prolina e hidroxiprolina, no así glutamina. El transporte de prolina mediado por ASCT1 es menos eficaz que el de alanina, tal y como se deduce de los mayores valores de la constatne de afinidad, de la velocidad máxima que muestra el transporte de prolina respecto al de alanina. En resumen, los resultados obtenidos demuestran que ASCT1 es capaz de acumular alanina. Dicha acumulación no está energizada por el gradiente electroquímico de Na+ sino por la salida de aminoácidos desde el interior celular, debido al mecanismo de intercambio obligatorio de aminoácidos que caracteriza a este intercambiador. Por lo tanto, es sugerido que ASCT1 media transporte activo de sus sustratos de tipo terciario. Hasta la fecha es el primer transportador humano clonado dependiente de NA+ que media transporte activa de sus sustratos.