Estudio de la actividad ADCC de linfocitos NK y células LAK de pacientes con linfoma folicular. Implicaciones terapéuticas de la aplicación clínica de estas células como estrategia de inmunoterapia combinada con anticuerpos anti CD20

Resumen

I. Inmunoterapia. El objetivo de la inmunoterapia en los linfomas consiste en utilizar el sistema inmune para destruir y erradicar las células malignas. II. Hipótesis: El tratamiento del linfoma folicular se basa en la combinación de quimioterapia con anticuerpos anti-CD20. Nos planteamos la hipótesis de que el efecto de la quimioterapia sobre el sistema inmune sano influya en la eficacia del tratamiento. Uno de los principales mecanismos de acción de los anticuerpos monoclonales es la generación del efecto ADCC. La segunda hipótesis del trabajo es que dicho efecto pueda ser modificado a través del tratamiento de inmunoterapia adoptiva con células LAK (linfocitos activados por IL-2) generados in vitro. III. Objetivos: Determinar el estado inmunológico del los pacientes con linfomas indolentes incluido el LF después del tratamiento de inducción con R-CHOP y Rituximab-Bendamustina. Determinar las subpoblaciones celulares tanto en sangre periférica como en las células LAK generadas de los pacientes con LF que participan en el ensayo clínico código EUDRACT: 2009-017829-19 y determinar “in vitro” la actividad citotóxica de las células LAK generadas de pacientes con LF frente a líneas tumorales y líneas celulares de linfoma CD20+, así como comparar la eficacia de Rituximab frente a obinutuzumab para ejercer ADCC. También se pretende correlacionar la potencia del efecto ADCC en función del porcentaje de células NK en las células LAK de los productos celulares. IV. Material y Métodos: Determinar el efecto del tratamiento de inducción con R-CHOP y BR sobre la estructura y composición celular del sistema inmune, se analizó la sangre periférica de 26 pacientes mediante citometría de flujo. En segundo lugar, para dar respuesta al resto de los objetivos se emplearon las muestras de sangre periférica y de alícuotas del producto celular generado in vitro de los primeros 12 pacientes participantes en el Ensayo clínico y se realizó expansión celular mediante cultivos con IL-2 y ensayos de citotoxicidad frente a diversas líneas celulares ( K562 y Daudi) así como la línea CRL-1596 que expresa CD20 para comparar la ADCC del Rituximab y el Obinutuzumab. V. Resultados: Previo al tratamiento no se observaron diferencias significativas en el número de CD4, CD8 y NK entre los pacientes que recibieron R-CHOP y BR. Sin embargo a los 6 meses de finalizado el tratamiento el esquema con BR indujo una linfopenia severa tanto CD4, como CD8 a diferencia del esquema R-CHOP (p<0.05). Los pacientes que recibieron BR presentaron una disminución estadísticamente significativa (p<0.05) de células NK después de 3-4 ciclos y a los 6 meses de haber recibido el tratamiento respecto a los niveles basales. Las células LAK generadas de pacientes con LF son capaces de lisar líneas células tumorales, pero solo un 17% de las células CRL-1596. Tanto el rituximab como el Obinutuzumab fueron capaces de aumentar la efectividad de las LAK por medio de la ADCC. Al comparar la ADCC inducida por rituximab frente a obinutuzumab se confirmó que el Obinutuzumab ejerce una ADCC superior a la inducida por rituximab (p=0.048) y que la cantidad de NK se correlaciona con la ADCC inducida por ambos anticuerpos. VI CONCLUSIONES 1. El tratamiento con R-CHOP es menos inmunosupresor que BR dado que la bendamustina induce una linfopenia severa que incide especialmente sobre los linfocitos T CD4 y las células NK 2. Las células LAK generadas a partir de sangre periférica mediante cultivo y expansión con IL-2 de pacientes con LF poseen capacidad citotóxica “in vitro” para destruir células linfomatosas y ejercen ADCC cuando se combinan con anticuerpos anti-CD20 como el rituximab o el obinutuzumab 3. El anticuerpo monoclonal anti-CD20 obinutuzumab es más potente que el rituximab en la inducción del ADCC de las células LAK generadas “in vitro” 4. El porcentaje de células NK o NK/T se correlaciona con citotxicidad y la ADCC de las células LAK del producto celular generado