Recogida, separacion y criopreservacion de celulas hematopoyeticas de cordon umbilical. Posibles aplicaciones a un programa de trasplante de progenitores hematopoyeticos

Resumo

La sangre de cordón umbilical (SCU) es una nueva fuente de progenitores hematopoyéticos. Las mejores técnicas de recolección, separación de la fracción celular, criopreservación y descongelación todavía no han sido definidas. Para realizar este estudio se utilizaron las muestras de SCU de 30 recién nacidos a término. Quince muestras se recolectaron mediante bolsas de hemodonación con CPD-A y otras quince con jeringas heparinizadas. Se compararon dos técnicas de separación de la fracción celular: centrifugación en gradiente de densidad sobre Ficoll y sedimentación tras la adición de dextrano de 500Kd. Después de criopreservar las células y alícuotas de las muestras de SCU sin procesar mediante una congelación programada se realizó el estudio comparativo de dos métodos de descongelación. Finalmente, con siete muestras distintas y separando antes la fracción celular con hidroxietil-almidón se procedió a obtener las células CD34+ mediante una técnica de inmunoadsorción con avidina-biotina. Ambas técnicas de recolección fueron eficaces para obtener unidades con un número de progenitores suficiente para utilizarlas en un trasplante. Las muestras recogidas con heparina consiguieron mejores eliminaciones plaquetares y eritrocitarias y mejores recuperaciones de células mononucleadas (CMN) y CD34+. La técnica de separación con dextrano retuvo la mayor parte de la fracción celular de la muestra, pero los lavados posteriores indujeron pérdidas importantes del número de progenitores. El Ficoll obtuvo unas muestras ricas en CMN, eliminando el resto de elementos sanguíneos excepto las plaquetas. La técnica del dextrano fué ventajosa al retener un mayor número de CMN y células CD34+. La criopreservación y descongelación no alteraron el número ni la capacidad clonogénica de los progenitores, excepto en aquellas muestras criopreservadas sin procesamiento previo. Independientemente del tipo de muestr