Regeneración adventicia de especies frutales del género Prunus para la aplicación de métodos biotecnológicos

Résumé

La selección y la mejora genética en las especies frutales se realiza generalmente a través de procesos lentos y laboriosos. Para acelerar y facilitar estos procesos se pueden aplicar distintas estrategias basadas en las técnicas de cultivo in vitro y en la biotecnología, incluyendo la clonación de genes y la transformación mediada por Agrobacterium. En Prunus, para aprovechar mejor estas técnicas, es necesario obtener métodos de regeneración a partir de células o tejidos de plantas adultas, cuyos caracteres agronómicos son ya conocidos. El objetivo principal de esta tesis ha sido establecer y optimizar un método de regeneración adventicia, a partir de segmentos de hoja, de algunos patrones del género Prunus, que permitan aplicar técnicas biotecnológicas como la selección precoz frente estreses bióticos o abióticos, y la obtención de plantas transformadas. Entre los patrones estudiados, "Mariana 2624" (Prunus cerasifera Ehrh.x P.munsoniana Wight & Hedr.) ha mostrado una alta capacidad organogénica, formando principalmente brotes, mientras que "Adafuel" (P.persica Batsch.x P.amygdalus Batsch.) ha regenerado mayoritariamente raíces. "Adesoto 101" (P. Insititia L.), "Mirobolán 605 AD" (P.cerasifera Ehrh.) y "Mariana GF 8-1" (P.cerasifera Ehrh.x P.munsoniana Wight & Hedr.) han mostrado una regeneración variable. En cambio, el patrón "A-843" (P.armenica L.) no ha mostrado respuesta organogénica. Las hojas enteras han mostrado mayor tasa de regeneración que las secciones, siendo el explanto proximal, con el peciolo, más efectivo que el intermedio o el apical. El protocolo propuesto comprende un pulso de 90 minutos en medio MS líquido, con 1.7 uM de 2,4-D, antes de colocar los explantos de hoja en un medio de regeneración LP con macronutrientes a mitad de concentración, y con NAA (2,6 uM), BAP (3,5 uM), sacarosa (2%) y Phytagel (0,28%). Además, el estudio de la identidad de las líneas regeneradas no ha revelado alteraciones fenotípicas o genéticas, tanto por su morfología, como por su contenido de DNA nuclear o mediante el uso de marcadores moleculares. Por último, se ha evaluado, de forma preliminar, la posibilidad de utilizar el protocolo de regeneración adventicia establecido para la transformación.