Desarrollo de un nuevo vector hibrido de adenovirus y alfavirus para transferir genes eficientemente en la terapia génica del hepatocarcinoma

Resum

En este estudio se ha desarrollado un nuevo vector híbrido de adenovirus-alfavirus que es capaz de expresar genes heterólogos específicamente en células derivadas de hepatocarcinoma humano (HCC). Este vector está basado en una denovirus dependiente de helper (HD-Ad) que porta la secuencia de un replicón de alfavirus derivado delcirus del Bosque de Semliki (SFV) bajo el control transcripcional del promotor de alfaproteína (AFP). El gen heterólogo que se desea expresar con este sistema se inserta bajo el control del promotor subgenómico de SFV dentro del replicón de SFV. Este vector reune varias ventajas, como una alta infectividad proporcionada por el sistema adenoviral, un alto nivel de expresión del transfén y la capacidad de inducir apoptosis, ambas proporcionadas por el replicón de SFV, y una alta especificidad tumoral, conferida por el promotor específico AFP, que dirige la transcripción el replicón de SFV. Se han construido vectores híbridos que portan el gen LacZ como gen marcador y el gen mIL-12 como gen terapéutico, bajo el control transcripcional del promotor subgenómico de SFV, respectivamente. También se han construido vectores HD-Ad control en los que LacZ y mIL-12 están clonados directamente bajo el control del promotor AFP. Los estudios in vitro han mostrado que los vectores híbridos son capaces de producir un nivel de expresión de proteína heteróloga hasta 300 veces mayor que el obtenido con los vectores control en células HCC. Además, la infección con el vector híbrido fue capaz de inducir muerte celular en células HCC a los 3-4 días postinfección. Cuando el vector híbrido que porta el gen LacZ se usó in vivo para infectar nódulos tumorales humanos de HCC xenografíados en ratones "nude" dio lugar a una elevada expresión de beta-galactosidasa en las células del tumor, que también resultó en la muerte de las mismas. Finalmente, el vector híbrido que porta el gen mIL-12 mostró una g