Desarrollo de vectores basados en el virus sv40producción, biodistribución y aplicaciones en el tratamiento de la cirrosis hepática y el cáncer de colon

Resumen

La mayoría de los protocolos de terapia génica se basan en el uso de vectores virales para la transferencia de genes terapéuticos. Estos vectores deben ser producidos en elevado título con protocolos bien establecidos. Además, deben ponerse a punto métodos que permitan controlar de manera eficiente la calidad de los virus producidos. Finalmente, es esencial el desarrollo de técnicas que cuantifiquen las producciones de estos vectores de manera reproducible y sencilla. En esta tesis se han puesto a punto protocolos que permiten una elevada producción de vectores recombinantes basados en el Virus de Simio 40 (rSV40). Posteriormente, estos vectores se han purificado y los lotes producidos se han sometido a controles de calidad para detectar la posible contaminación por partículas defectivas interferentes o virus SV40 competentes en replicación, generados por recombinación homóloga con el genoma celular. Por último, los lotes de virus se han titulado utilizando diferentes protocolos. Siguiendo el protocolo desarrollado se han producido vectores rSV40 que dirigen la expresión de genes reporteros, como la luciferasa de luciérnaga, o genes terapéuticos como las interleucinas 12 ó 15 de ratón (IL-12 o IL-15) o el factor de crecimiento similar a la insulina de tipo I de la rata (IGF-I). En todos los casos se ha comprobado que las células infectadas por estos virus expresan los genes heterólogos y que estas proteínas son funcionales. Estos vectores nos han permitido estudiar la biodistribución de rSV40 y su eficiencia en la prevención de la cirrosis hepática y el tratamiento del cáncer de colon. Los vectores rSV40 desarrollados pueden infectar todas las células en cultivo estudiadas, entre ellas, células de origen hepático, tumoral o del sistema inmune. Los niveles de expresión del gen heterólogo varían dependiendo de cada tipo celular, pero en todos los casos la expresión se diluye a medida que se amplifican las