Obtención y caracterización genética y biológica de mutantes rugosos de brucella abortus

Resumo

Se obtuvieron mutantes rugosos de Brucella abortus mediante inserción de un transposón en dos genes de la región wbk (wbkA [glicosiltransferasa putativa, anteriormente denominada rfbU] y per [perosamina sintetasa]), en manB (pmm [fosfomanomutasa, anteriormente llamda rfbK]) y en un gen no asignado. En consonancia con los datos genéticos, el análisis electroforético, la cuantificación del ácido 2-ceto-3-manno-D-octulosónico y los inmunoblots con anticuerpos monoclonales frente a la cadena O y frente a los epítopos externo e interno del núcleo del lipopolisacárido (LPS) mostraron que los mutantes wbk no expresaban cadena O y no presentaban defectos en el núcleo del LPS. El núcleo del LPS del mutante manB carecía del epítopo externo, y dicho gen fue denominado manB núcleo para distinguirlo del gen manB O-Ag' perteneciente a la región wbk. El cuarto gen (provisionalmente denominado wa**) codificaba una glicosiltransferasa putativa implicada en la síntesis del núcleo interno del LPS, pero el mutante conservaba el núcleo externo. El análisis de la sensibilidad a fagos y a polimixina, la exposición o expresión de los epítopos de proteínas de membrana externa, núcleo del LPS y lípido A, el grado de acilación del lípido A, la sensibilidad al sistema del complemento, el potencial zeta y la hidrofobicidad de superficie mostraron diferencias significativas en la topología de la membrana externa y en las propiedades generales de los mutantes. En el modelo murino, los mutantes presentaron diferentes grados de atenuación e indujeron producción de anticuerpos frente a LPS de tipo rugoso y frente a proteínas de membrana externa. Los mutantes deficientes en el núcleo de LPS y la cepa RB51 no resultaron vacunas efectivas frente a B.abortus en el modelo murino. Los mutante per y wbkA indujeron protección, pero menos que la cepa vacunal lisa S19, y los controles sugerían que en estas diferencias influían grandement