Expresión y localización en membrana de las isoformas de ae2 en hepatocitos polarizados

Resumo

El intercambiador de aniones 2 humano expresa tres isoformas diferentes, una de ellas expresada ubicuamente y dos transcritas alternativamente en hígado y riñón, que difieren asimismo en sus extremos amino-terminales. En este trabajo se propuso determinar la actividad intercambiadora y la localización de estas isoformas en hepatocitos donde previamente se había propuesto que el intercambiador de aniones 2 participaba en la secreción biliar de bicarbonato en el polo apical de estas células polarizadas, en contraste con su papel homeostático en la membrana bsaolateral de otros tipos celulares. Para estudiar las características de cada isoforma de AE2 por separado, se diseñaron y contruyeron vectores de expresión para cada isoforma fusionada en su extremo carboxi-terminal a la proteína verde fluorescente GFP. También se puso a punto un modelo de transfección y repolarización de hepatocitos primarios de rata, en el cual se determinó que las tres isoformas recombinantes expresadas por los vectores construidos se localizaban en el polo apical mediante un mecanismos parcialmente dependiente de microtúbulos, en constraste con la localización observada en una línea celular polarizada derivada de riñón, las células MDCK. El mecanismo de direccionamiento a la membrana canalicular se estudió por transducción de hígado intacto usando inyección hidrodinámica de los plámidos de expresión de las isoformas de AE2, y resultó ser un proceso indirecto con un paso intermedio de inesrción en la membrana basolateral. Estos resultados indican que las tres isoformas de AE2 comparten su localización en membrana en las células polarizadas donde se expresan, y que ésta localización es específica de tipo celular, de forma que en hepatocitos las tres isoformas se dirigen al polo apical donde podrían participar en la secreción biliar de bicarbonato. Asimismo, en este trabajo se realizó un estudio comparativo preliminar sob