Efecto de la hipoxia sobre la expresión de la sintasa inducible de óxido nítrico y la adrenomedulina en modelos in vivo e in vitro de la lesión aguda de pulmón

Résumé

El tratamniento con lipopolisacárido (LPS) reproduce algunos de los síntomas de la lesión aguda de pulmón (ALI), y la hipoxemia es una de las principales características de esta enfermedad; por lo que hemos desarrollado un modelo de lesión aguda de pulmón que combina los tratamientos de hipoxia normobárica aguda y LPS en pulmón de rata (modelo in vivo) y en distintas líneas celulares establecidas (modelo in vitro). En ambos modelos se combinan el tratamiento de LPS (0,1 mg/kg, i.p en el modelo animal y 100 ng/ml en las líneas celulares) e hipoxia aguda (9% O2 en el modelo animal y 1% O2 en las línes celulares) en ratas Fisher Harlan y líneas celulares procedentes de pulmón de rata. Se analizaron cuatro grupos de estudio: grupo 1 (normoxia), grupo 2 (hipoxia), grupo 3 (normoxia + LPS), grupo 4 (hipoxia +LPS). Varios autores han descrito un aumento de la expresión de la sintasa inducible de óxido nítrico NOS2)j y la adrenomedulina (AM) en pacientes con ALI, y ambos factores son regulados por los tratamientos con hipoxia y LPS. Se ha estudiado la expresión de mabos factores en los modelos in vivo e in vitro aplicando las técnicas de Northern blot, Western blot, hibridación in situ de mRNA, inmunocitoquímica y radioinmunoensayo para detectar la producción NOS2 y AM. Se ha obervado que el tratamiento con hipoxia + LPS produce edema pulmonar y una acumulación de moléculas extravasadas en la pared de los vasos sanguíneos, lo qu epareceindicar que este tratamiento reproduce las fases tempras de ALI. En el modelo in vivo el tratamiento combinado produce una potenciación de la expresión de NOS2 y AM en comparación con ambos tratamientos por separado. En el caso de NOS2, este aumento de la expresión es debido a una inducción de la migración al pulmón de células inflamatorias inmunorreactivas para NOS2 identificadas como monocitos, neutrófilos y linfocitos. En el caso de la AM, sólo la línea celular de macrófagos