Development and characterization of a new animal model for autoimmune hepatitis

Laburpena

Este trabajo explora el uso de un virus adeno-asociado (AAV) para la expresión de interleukina-12 (IL-12) en el hígado como nueva aproximación para la inducción de respuestas inmunes específicas frente a la cápside del AAV, con el objetivo de reproducir el escenario observado en pacientes tratados que desarrollaron una respuesta inmune celular frente al virus tras recibir un AAV que expresaba el Factor IX de coagulación. Observamos que esta estrategia ha sido capaz de inducir dicha respuesta inmune, sin embargo, no ha sido capaz de desencadenar la eliminación de los hepatocitos transducidos por el virus. Además, hemos comprobado que el AAV que expresa IL-12 (AAV8-IL12) constituye una herramienta útil para el estudio del efecto de la inflamación hepática sobre la expresión génica mediada por AAV. En este estudio mostramos que la IL-12 induce una inhibición de la expresión génica mediada por AAV a través de la inducción de la producción de IFN-γ por las células T y NK. También hemos observado que el efecto inhibitorio del IFN-γ puede ser revertido por la administración de agentes demetilantes o corticoides. Además, mostramos que la inflamación hepática no altera la expresión de un AAV previamente establecido pero que, sin embargo, se debe evitar la administración de un AAV a un hígado inflamado. Este proyecto también muestra que la expresión transitoria de bajos niveles de IL-12 en el hígado desencadena la rotura de la tolerancia frente a antígenos hepáticos, dando lugar al desarrollo de un nuevo modelo de hepatitis autoinmune tipo 1 (AIH-1) en ratón. Los análisis serológicos han revelado que los animales tratados con IL-12 presentan numerosas similitudes con pacientes que presentan AIH-1: aumento en los niveles de inmunoglobulinas y transaminasas, y presencia de anticuerpos anti-nucleares (ANA) y anti-actina de músculo liso (ASMA). Por otro lado, el análisis histopatológico del hígado constituye una herramienta definitiva para la identificación de la AIH; la presencia de hepatitis de interface, rosetas hepáticas, infiltrado plasmacítico y la ausencia de daño en los dúctulos biliares son algunos de los fenómenos histológicos asociados a esta enfermedad y presentes en nuestro modelo. Estudios complementarios han revelado que las células T CD4+ and CD8+ productoras de IFN-γ juegan un papel esencial en el desarrollo de la enfermedad y que otras poblaciones, como las células B, NK o NKT, son dispensables. Por otro lado, hemos observado que los ratones que desarrollan esta enfermedad presentan un elevado número de linfocitos T CD8+ efectores y linfocitos T CD4+ con fenotipo Th1 en el hígado que, además, son capaces de proliferar en el hígado de un recipiente singénico tras una transferencia adoptiva. Además, hemos observado que el eje PD-1/PD-L1 juega un papel fundamental en el control del daño hepático.