Comportamiento de los condrocitos de cordero, cultivados in vitro segun la edad, la patologia y el medio de conservacion

Abstract

TITULO: COMPORTAMIENTO DE LOS CONDROCITOS DE CORDERO, CULTIVADOS IN VITRO SEGÚN LA EDAD LA PATOLOGÍA y EL MEDIO DE CONSERVACIÓN RESUMEN: Por problemas en crio preservación, mantenimiento de la viabilidad celular y estado celular, nos planteamos la hipótesis: Los condrocitos obtenidos de' pacientes en diferentes edades, medios de conservación tienen distinta proliferación y expresión génica. Material y Métodos. Obtuvimos el fémur distal de corderos. Fase 1: cartílago joven, viejo y artrósico. Utilizamos 3 corderos: un cordero joven de 4 meses de edad, formó el grupo de cartílago joven; a otro se realizó menisectomía total, se dejo evolucionar 2 meses y, se obtuvo cartílago de grupo artrósico; y una oveja vieja de 8 años de edad, para cartílago viejo; se extrajeron las células, y se estudio morfología celular, proliferación mediante ELISA, y expresión génica mediante rt-PCR. Fase 2: Crio preservación. Nueve corderos de 4 meses de edad, se extrajo el cartílago y se dividió: un grupo control -sin crio preservación que se estudio tan pronto se obtuvo; tres grupos más: 4°c, que se dividió en 3 grupos control, pbs, DMEM; así mismo un grupo a -80°C y -196°C, cada uno dividido en grupo Control, Glicerol y DMSO al 10%. A estos grupos se realizó estudio de viabilidad celular; análisis de la matriz extracelular, se estudiaron las proteínas tgf-β, igf-1, mmp-2, 9 y 13; y se realizó cultivo de estas células, para analizar su expresión génica. Fase 3: Tratamiento con factores de crecimiento. Las células de fase 1, y de fase 2 se trataron con factores de crecimiento (TGF-β, FGF-a, BMP-7 e IGF-1), para valorar modificaciones en la expresión fenotípica. Resultados: los condrocitos jóvenes mantuvieron una proliferación significativamente superior a la de las células viejas y artrósicas. El tratamiento con factores de crecimiento demostró que el FGF-a e IGF-1, potenciaron de forma significativa la proliferación en los 3 grupos de estudio. La combinación de estos factores estimularon de forma significativa el efecto que produjeron por separado. Los grupos crio conservados disminuyeron su viabilidad aproximadamente un 50% a las 4 semanas. El cartílago almacenado a 4 °C con pbs incrementó la expresión de Colágeno 2, TGF-β y BMP-7. Los grupos almacenados a -80 °c presentaron aumento de Colágeno 1, MMP-2, 9 y 13. No obtuvimos células para ensayos de expresión génica de las células mantenidas a -196°C