Papel de la oxido nítrico sintasa en la acantolisis del penfigo vulgar en un modelo murino

Zusammenfassung

El pénfigo vulgar (PV) es una enfermedad ampollosa autoinmune, potencial mente letal, mediada por auto anticuerpos igG, dirigidos frente a diferentes antígenos de los queratinocitos, entre los que destacan las desmogleínas (Dsg) 1 y 3. Aunque se conoce que en la acantólisis de los queratinocitos participan diferentes vias de señalización intracelular, hasta ahora el tratamiento de elección es la asociación de corticosteroides a fármacos inmunosupresores (con los efectos secundarios que conllevan). Gracias a la similitud entre las Dsg 1 y 3 humanas y murinas, se ha podido reproducir la enfermedad en ratones recién nacidos. Nosotros hemos querido investigar nuevos mecanismos fisiopatológicos que puedan participar en el PV en este modelo animal; por lo que hemos estudiado la participación de la i NOS, la eNOS, la nNOS, la NADPH oxidasa y el factor de transcripción nuclear NFκB. Para la inducción de la enfermedad, se emplearon los sueros procedentes de 3 pacientes afectos de PV cutáneo-mucoso y de 1 control sano, de los cuales se purificó la igG, que fue inyectada por vía intradérmica en el dorso de ratones de 1-2 días de vida. Empleamos 2 estirpes de ratones: los C57BL/6J y los wild-type NFκB, que corresponden a las especies modificadas genéticamente (knockout) para la i NOS (B6.129P2-Nos2tmlLau/3), la NADPH oxidasa (B6.129s6-cybbtmlDin/J) y el NFκB (B6;129P2-NFκBltmlBal/D). Para el estudio de la participación de las diferentes moléculas, también se utilizaron inhibidores específicos (1400W para i nos, l-nio para eNOS, smtc para nNOS, l-nmma para las nos en general, dpi para la nadph oxidasa, parthenolide para el NFκB y la genisteina como inhibidor general de las tirosina quinasas), que fueron inyectados también por via intradérmica, 2 horas antes de la inyección de las igG. Todos los experimentos se realizaron por triplicado y en todos se realizó estudio de inmunohistoquímica (se analizó la expresión de i NOS, eNOS, nNOS, NFκB, nadph oxidasa y de residuos de nitrotirosina). En los queratinocitos de la epidermis intacta obtenida tras la inyección de igG procedente de control sano se observó la expresión de i NOS (en el núcleo) y de nNOS, NFκB y nadph oxidasa (en el citoplasma), mientras que no se detectaron depósitos de eNOS y de'residuos de nitrotirosina. En cambio, en los queratinocitos acantolitieos tras la inyección de igG de paciente se detectó el mareaje de todas las moléculas estudiadas, llamando la atención su intensidad y su localización en la membrana acantolitica o en estrecha proximidad a esta última (excepto en el caso del NFκB y la NADPH oxidasa que se translocaron al núcleo), únicamente el inhibidor especifico de la nNOS (smtc), el inhibidor general de las nos (L-nmma) y el inhibidor general de las tirosina quinasas (genisteina) previnieron la inducción de la enfermedad. Además, tras el empleo de genisteina, se detectó nNOS en el citoplasma de los queratinocitos de forma difusa, con una imagen idéntica a la de la epidermis intacta tras la inyección de igG de paciente control. Con estos datos se puede concluir que el óxido nítrico derivado de la nNOS participa en el proceso de acantólisis en nuestro modelo murino, siendo un hallazgo no descrito previamente en esta enfermedad.