Efecto del tacrolimus/fk-506 y la solución de belzer/universidad de wisconsin en la regeneración nerviosa a través de autoinjertos y aloinjertos nerviosos tras lesiones en el nervio tibial de la rataimplicaciones clínicas en la cirugía del nervio periférico

Abstract

Los daños producidos en el nervio periférico pueden causar importantes déficits funcionales. Desde que se descrió el primer injerto nervioso, su utilización ha sido aceptada universalmente en la clínica. Sin embargo, su uso no adolece de desventajas. Por eso, se han estudiado distintos tipos de materiales artificiales o biológicos como potenciales alternativas; así como el uso de aloinjertos nerviosos. El principal problema al utilizar los aloinjertos es la respuesta inmune. El almacenamiento temporal de aloinjertos nerviosos requiere de inmunosupresión inducida en el receptor que tiene como resultado obtener una regeneración nerviosa a través del aloinjerto comparable al autoinjerto. El efecto del FK-506 en la regeneración nerviosa tanto con autoinjertos como con aloinjertos ha sido demostrado. El propósito de este estudio es establecer un posible efecto sinérgico o aditivo al administrar FK-506 de forma continua con bombas osmóticas y aloinjertos preservados a 4ºC durante 3 semanas en SUW, comparado con el uso clásico de autoinjertos. Se utilizó la rama tibial del nervio ciático de la rata como modelo experimental. Para comparar la eficacia de los tratamientos se cuantificó la población neuronal en la médula espinal y el número de axones a nivel distal en el cabo distal de los injertos nerviosos. Se seleccionaron ratas macho Wistar (n=126). El grupo donante estaba formado por animales procedentes de nuestro laboratorio (n=54) (180-200 gr). Animales administrados por Charles River Breeding Labs (n=72) (200-220 gr) fueron seleccionados como receptores y asegurar así, diferencias en el Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH). El periodo de supervivencia de los animales fue de 4 semanas. 48 horas previas al sacrificio se colocó una cámara de silicona en posición distal al cabo distal de la neurorrafia con 2 l de un marcador neuronal retrógrado y fluorescente para visualizar las neuronas cuyos axones pasaran los injertos (fluorogold). Se ha utilizado el FK-506 mediante la implantación de bombas osmóticas Alzet (2ML4) en el dorso del animal con un rango de 0,7 mg/día (dosis equivalente 3,5 mg/Kg/día) durante 4 semanas. Las concentraciones de FK-506 al final del estudio experimental fueron testadas por inmunoensayo de micropartículas (MEIA). Se extrajeron los injertos nerviosos, incluyendo los 5 mm proximales y distales tiñéndolos con las técnicas de Bodian, Masson y hematoxilina-eosina para visualizar los axones, tejido cicatricial y células inflamatorias. Los segmentos nerviosos proximal y distal se utilizaron para contaje axonal, mientras que secciones del injerto se usaron para determinar las células inflamatorias. El estudio de la densidad de las neuronas marcadas en la médula espinal lumbar se ha realizado mediante técnicas de estereología. Las neuronas analizadas se clasificaron en grandes (mayores de 20 µm) y pequeñas (menores de 20 µm), redondas o fusiformes. Se calculó el número y diámetro de los axones mielinizados. Se estimó el número total de neuronas conociendo el volumen del área dónde se encuentran las neuronas marcadas con FG, aplicando el método de Cavalieri. Los axones de la rama tibial se contaron también mediante técnicas estereológicas con la técnica del fraccionador. La administración continua de FK-506 por medio de bombas osmóticas fue efectiva para prevenir el rechazo del aloinjerto a través del CMH en ratas, sin respuesta tóxica grave a la dosis empleada. Más aún, al reducir la antigenicidad de los nervios en la SUW durante tres semanas se alcanzó el mismo resultado que con los aloinjertos tratados con FK-506. Sin embargo, no pudimos concluir que existiera efecto aditivo al utilizar tanto el FK-506 como la SUW en la regeneración del nervio periférico. Si comparamos la población neuronal de cada grupo, el FK-506 o la criopreservación mejoraron el número de neuronas grandes, pero sin efecto sobre las pequeñas.