Transportadores de albúmina para la administración de oligonucleótidos antisentido

  1. ARNEDO HERNÁNDEZ, AMAIA
Dirigée par:
  1. Juan Manuel Irache Garreta Directeur
  2. Socorro Espuelas Millán Co-directrice

Université de défendre: Universidad de Navarra

Fecha de defensa: 17 juin 2002

Jury:
  1. Miguel Sanchez Gonzalez President
  2. María Jose Iraburu Elizalde Secrétaire
  3. Manuel Guzmán Navarro Rapporteur
  4. M. Jose Alonso Fernandez Rapporteur
  5. María del Mar Goñi Leza Rapporteur
Département:
  1. (FFN) Ciencias Farmacéuticas

Type: Thèses

Teseo: 91925 DIALNET

Résumé

Los oligonucleótidos antisentido son moléculas terapéuticas altamente específicas para el tratamiento de enfermedades virales, enfermedades autoinmunes y cáncer entre otras. Sin embargo su aplicación terapéutica está limitada por su baja estabilidad enzimática, su incapacidad para atravesar la membrana celular, y su rápida degradación en endosomas. En vista de las propiedades fusogénicas de la albúmina y su afinidad de unión por los oligonucleótidos se han desarrollado dos sistemas transportadores de oligonucleótidos basados en albúmina: nanopartículas y oligonucleótidos, La cuantificación de los oligonucleótidos se ha realizado por electroforesis capilar en zona que nos permite cuantificar los antisentidos con precisión y exactitud, de forma rápida y sencilla. Los complejos albúmina-oligonucleótido se han caracterizado mediante espectroscopía de fluorescencia y anisotropía de fluorescencia, obteniendo una estequiometría de entre 4 y 5 moléculas de oligonucleótido interaccionan con cada molécula de oligonucleótido, con una constante de afinidad cercana a 10-8. Los estudios de asociación celular mostraron una diminución de las asociación de oligonucleótido a células en presencia de albúmina, además los complejos modificaron el patrón de internalización citoplasmático perinuclear hacia una elevada localización nuclear. Finalmente se realizaron estudios de degradación enzimática de los oligonucleótidos, comprobado que los complejos no eran capaces de proteger a los oligonucleótidos de su degradación. Finalmente se ha estudiado la capacidad de los complejos para incrementar la actividad antiviral de los oligonucleótidos mediante dos ensayos, reducción en placa y beta-galactosidasa, ambos ensayos mostraron que los complejos aumentaron la actividad de los oligonucleótidos libres. Se han desarrollado dos sistemas nanoparticulares mediante desolvatación controlada en etanol y posterior reticulac