Genetic profile, co-alterations of pten, p16 and cdk4 genes, and therapeutic role of pten in human astrocytomas

Résumé

Los astrocitomas constituyen el grupo de tumores cerebrales más frecuente. A fin de caracterizar las alteraciones en el numero de copias en el DNA de gliblastomas, realizamos CGH(Compartive Genomic Hybridization) en 22 casos de gliblastomas. La región cromosómica que presentó ganancia de material genético más frecuentemente se encuentra en 7p, mientras que las deleciones más frecuentes se dieron en los cromosomas 10 y 13q. No se encontraron deleciones en 9p donde se ha descrito una gran frecuencia de deleciones homocigóticas en glioblastomas. Nuestros resultados de CGH nos llevaron a investigar posteriormente el estado de los genes PTEN (10q23.3) y p16(9p21) en astrocitomas. La tecnología aplicada ha sido: PCR-SSCP-secuenciación, PCR diferencial y PCR especifica para metilación. Nuestros resultados muestran que PTEN diferencial y PCR especifica para metilación.Nuestros resultados muestran que PTEN se encuentra mutado en un 27% de glioblastomas, pero no en astrocitomas de grado II y III.p16 sufrio deleciones homocigóticas en 27% de glioblastomas y 13% de astrocitomas de bajo grado. La metilación de p16 en el promotor se detectó en un 9% de los casos de glioblastomas y un 6% de astrocitomas de bajo grado. A fin de investigar más especificamente el papel funcional de PTEN en glioblastomas, construimos una linea celular empaquetadora que produce ventores retrovíricos que expresan PTEN de tipo salvaje (no mutado). Hemos usado el vector para infectar la linea celular A172 que contiene una delecion homicigótica de PTEN. Hemos encontrado que, tras la transducción de PTEN, se redujo el crecimiento y proliferación de la línea celular A172 en un 50% ademas de elevarse significativamente la expresión de p27 y de reducirse la de Akt activa (foforilada). Estos resultados sugieren que la sobreexpresión de PTEN en células de glioblastoma que carecen de PTEN es suficiente para inhibir el crecimiento celular de estas mediante la rut