Construccion y caracterizacion de mutantes de brucella sensibles a la polimixina

Résumé

La envoltura celular (EC) de Brucella presenta una serie de propiedades (incluida la resistencia a péptidos catiónicos) que hacen que pueda ser considerada como un factor de virulencia. A partir de la cepa virulenta B.abortus 2308 se construyeron mediante transposición unos mutantes, que manteniendo un lipoposacárido (LPS) de tipo liso, presentaban las propiedades de la EC alteradas. Dichos mutantes fueron más sensibles a péptidos catiónicos (polimixina B, poli-L-lisina y melitina), antibióticos y surfactantes (SDS,deoxicolato y sarkosil), y exhibieron una mayor hidrofobicidad superficial. La capacidad de invasion en células HeLa y macrofagos resultó ser significativamente menor que la de la cepa parental, y las pocas bacterias capaces de penetrar en las células eucariotas eran rápidamente destruidas. De igual modo, los estudios realizados en ratón mostraron que los mutantes eran avirulentos. El hecho de que la velocidad de crecimiento fuera similar a la de la cepa parental demuestra que los genes alterados no son esenciales para la bacteria y que estan relacionados directamente con la virulencia. El análisis genetico mostró que el transposón se localizaba en los mutantes en dos genes adyacentes (denominados bvrR y bvrS por Brucella virulence related) que forman parte de un sistema regulador de dos componentes. Este sistema presentó una homología superior al 70% con los sistemas chvI/exoS de Rhizobium meliloti y chvI/chvG de Agrobacterium tumefaciens(bacterias filogenéticamente proximas a Brucella), implicados en la virulencia y el establecimiento de la relación de la bacteria con celulas eucariotas. El análisis de los componentes de la EC mostró que los mutantes no expresaban la proteína Omp25, una de las proteinas principales de la membrana externa. Dicha proteina ha sido recientemente incluida en una familia de la que varios de sus miembros están relacionados con la invasión celular y virulencia. El analisis medi