Estudio del factor nf-kappa b en la infeccion por el virus de la hepatitis c

Abstract

NF-kB/Rel es una familia de proteínas que actúan como factores de transcripción regulando genes implicados en la respuesta inmune, proliferación celular y respuesta antiviral. Estas proteínas se encuentran inactivas en el citosol, unidas a la subunidad represora IkB. En situaciones de estrés celular es liberada la subunidad IkB y dímeros NF-kB activos se translocan al núcleo uniéndose a los promotores de ciertos genes. Nuestro objetivo ha sido estudiar los niveles de NF-kB en pacientes con infección crónica por el virus de la hepatitis C (HCV+). En células mononucleares desangre periférica (CMSP) de 26 pacientes HCV+y 24 controles sanos estudiamos los niveles de RNAm, por la técnica RT-PCR, de las subunidades RelA, p105/p50 e IkB-alfa. Asimismo, determinamos por western-blot los niveles de RelA, p105, p50 e IkB-alfa en extractos citosólicos y de RelA y p50 en extractos nucleares. Además, realizamos ensayos en geles de retardo para determinar los dimeros NF-kB unidos a la secuencia consenso kB. En tejido hepápitco de 16 pacientes HCV+ y en 12 hígados sanos se determinó la expresión génica de RelA, p105-p50 e IkB-alfa por la técnica de RT-PCR. Por último, determinamos por western-blot en extracto hepático total los niveles de p105, p50, RelA e IkB-alfa. Resultados: En CMSP encontramos un aumento significativo de los niveles de RNAm de la subunidad p105/p50 en pacientes HCV+ respecto a controles sanos (0,64+-0,03 vs 0,56+-0,02, p<0,05), así como niveles incrementados de proteína p50 en el núcleo de CMSP de estos pacientes (p<0,01). Los niveles de las subunidades RelA e IkB-a fueron normales, tanto a nivel de RNAm, como de proteína. En los extractos nucleares de CMSP de los pacientes HCV+ encontramos un aumento de homodímeros p50/p50, mientras que los niveles de los heterodímeros p50-RelA fueron normales. No encontramos asociación entre los niveles de las subunidades NF-kB en CMSP y parámetros de da