El sistema de óxido nítrico en la corteza cerebral de la rata adulta efectos de un modelo ex vivo de isquemia global y reperfusión

Resumen

En situaciones de isquemia se producen especies reactivas del oxígeno y del nitrógeno, y el consiguiente estrés oxidativo y nitrosativo parece contribuir significativamente al daño tisular. Este trabajo ha investigado los efectos que la privación de oxígeno y glucosa tienen sobre la regulación de las isoformas neuronal e inducible de la enzima óxido nítrico sintasa en la corteza cerebral de rata, así como el efecto nitrante que sobre las proteínas tienen las especies reactivas formadas, especialmente el peroxinitrito producido por la combinación del NO con el superóxido. El modelo experimental consistió en la perfusión in situ del cerebro con una privación de oxígeno y glucosa durante 30 minutos, seguida o no por varios periodos de reperfusión. Las técnicas empleadas para el estudio fueron: inmunocitoquímica, Western blotting, actividad enzimática de la NOS y difusión por resonancia magnética. El daño cerebral producido por la isquemia y posterior reperfusión quedó demostrado por las imágenes de difusión obtenidas por resonancia magnética. Este daño se vio disminuido tras la administración del inhibidor de NOS, L-NAME. Después del periodo de isquemia y durante las primeras horas de reperfusión, se observó un progresivo aumento en la cantidad de nNOS, demostrado por Western blotting, que se correlacionó inmunocitoquimicamente con un aumento del número de neuronas y prolongaciones inmunorreactivas para nNOS. A partir de las 6 horas de reperfusión hubo un descenso en la cantidad de nNOs, con una disminución en el número de interneuronas inmunorreactivas y un deterioro morfológico de estas a lo largo del tiempo. La iNOS apareció en neuronas piramidales de las capas IV-V tras 4 horas de reperfusión. Demostramos la presencia de nitrotirosina en neuronas y células gliales en la corteza cerebral de ratas control. Se observó un aumento de la expresión y modificación de su distribución intracelular t