Caracterización del mecanismo molecular por el que la proteína NS1 del virus de la gripe es capaz de estimular la traducción de los mensajeros virales

Resumo

La proteina NS1 del virus de la gripe estimula la traducibilidad de los RNAs mensajeros del virus de la gripe. La especificidad de dicha estimulación es conferida por la region 5¿no codificante de los mensajeros virales, y sucede en la fase de la iniciación de la traducción. El objetivo general de esta tesis doctoral es el de tratar de conocer el mecanismo molecular por el que la proteina NS1 estimula el reclutamiento de complejos de preiniciacion 43S a la region 5¿no codificante del mRNA gripal. Para ello se abordó el analisis mutacional de la proteína NS1. Se generó una colección de mutantes de deleción de la proteina viral, que se sometio a una caracterizacion previa, en la que se observó que los niveles de acumulación, la distribución subcelular y la capacidad de union a RNA de todos los mutantes generados eran semajantes a los de la proteina silvestre. A continuación se analizó su capacidad para estimular la traducibilidad de un mRNA viral, y para inducir la retención en el nucleo de los mensajeros poliadenilados. Se demostró que la mitad amino terminal de la proteina NS1 es responsable de ambas funciones, y que la capacidad de union a RNA no es suficiente para retener en el nucleo el mensajero de la nucleoproteina viral, ni para estimular la traducibilidad de las moleculas del mRNA de NP presentes en el citosol. Se llevó a cabo la búsqueda de factores de la maquinaria de iniciación con los que la proteina NS1 interacciona para llevar a cabo la estimulación traduccional. Así, se ha demostrado que la proteina NS1 es capaz de interaccionar directamente con el factor el IF4GI. El analisis mutacional de ambas proteinas indico que los 113 aminoacidos de la proteina NS1 para estimular la tasa de traducción y su capacidad de interaccionar fisicamente con eIF4GI. La proteina NS1 interacciona con PABP1, la proteina de unión a poliA citosolica, a traves de sus primeros 81 aminoacidos. Esta unión, directa y no media