Inmunoterapia dirigidaestudio preclínico de la eficacia anti-tumoral de car-t y car-cb-nk para el tratamiento de neoplasias hematológicas de célula b madura

Laburpena

El cáncer es definido como el crecimiento anormal de un grupo de células debido a anomalías en los circuitos de regulación que lideran la proliferación y homeóstasis de las células sanas. Las neoplasias hematológicas son generalmente enfermedades de gente de edad avanzada siendo la media entre los 65 y 70 años. El aumento de la esperanza de vida en los países desarrollados incrementará no solo el número de pacientes sino también de mayor edad con enfermedades hematológicas en los próximos años. Las neoplasias hematológicas de células B, en concreto el mieloma múltiple (MM) y el linfoma no Hodgkin (LNH) de célula B son enfermedades incurables o con un mal pronóstico después de una primera recaída, respectivamente. Este hecho pone de manifiesto la necesidad de invertir en nuevas terapias que den más opciones de tratamiento a estos pacientes. En los últimos años, la inmunoterapia se ha desarrollado exponencialmente dando lugar a nuevos tratamientos para distintas enfermedades. En concreto, la terapia CAR basada en la modificación genética de los linfocitos T para que expresen en su membrana un receptor antigénico quimérico (Chimeric Antigen Receptor, CARs por sus siglas en inglés) se ha posicionado como una nueva terapia con grandes resultados en neoplasias hematológicas, especialmente el CAR-antiCD19 para la leucemia linfoide aguda (LLA). Los CARs reconocerán específicamente un antígeno tumoral y ejercerán una respuesta citotóxica frente a las células tumorales que presenten ese antígeno. Sin embargo, uno de los principales problemas de esta terapia es la pérdida temprana del CAR produciendo recaídas de la enfermedad, que podría deberse a la reacción inmunológica frente a los CARs de origen murino. Además, los linfocitos T autólogos tras las varias líneas de tratamiento que reciben los pacientes, pueden no estar en condiciones óptimas para la terapia CAR. Recientemente han aparecido las células NK como fuente alternativa de células inmunes en la terapia CAR que podrían usarse de forma universal. Sin embargo, los primeros resultados en preclínica y clínica no son los esperados, debido a la dificultad de modificar las NK y la necesidad de añadir citoquinas para su proliferación. Estudio 1: La proteína BCMA fue identificada como un antígeno muy prometedor para ser usado en la terapia CART para tratar pacientes de MM en 2013. Des de entonces, varios estudios se han ido relevando en el tiempo, permitiéndonos el diseño y desarrollo de nuestro propio CARTBCMA (ARI2) y su posterior versión humanizada para evitar la posible pérdida temprana del CAR debido a la parte murina del CAR. Todos los ensayos in vitro e in vivo han demostrado que ambos CARTs, murino (ARI2m) y humanizado (ARI2h) ejercen el mismo efecto citotóxico frente a las células tumorales de MM. Además, toda la preclínica realizada en esta tesis ha sido la base para el ensayo ensayo clínico multicéntrico para pacientes de MM con el producto ARI2h en España. Otra cuestión relevante ha sido el análisis del BCMA soluble (sBCMA) en la actividad de CARTBCMA. La enzima g-secretasa libera al medio el antígeno BCMA en su forma soluble (sBCMA), disminuyendo por tanto el BCMA presente en la membrana de las células tumorales. Varios estudios aseguran que el sBCMA no afecta a la actividad del CARTBCMA mientras que otros incluido el nuestro si hemos observado una disminución de la actividad del CARTBCMA debido al sBCMA. Por tanto, creemos que el sBCMA si afecta la actividad del CART in vitro, pero es necesario estudiar si esta inhibición del sBCMA mediante inhibidores de la g-secretasa con fármacos como DAPT conllevan a Página 4 de 4 una mejora considerable en pacientes o la inhibición debida al sBCMA solo se observa en tiempos cortos como son los ensayos in vitro. Actualmente, ya hay un ensayo clínico analizando la combinación de estos inhibidores con células CART-BCMA (NCT03502577). Estudio 2: Las células NK presentan una serie de características que las hacen una fuente de células inmunes muy prometedora. En concreto, nuestro grupo trabajo con células NK de sangre de cordón umbilical (CB-NK). Estas CB-NK pueden ser expandidas in vitro y ejercen una actividad citotóxica independiente de antígeno. Además, pueden ser usadas de forma alogénica ya que no desarrollan enfermedad de injerto contra el huésped (EICH) en los pacientes, lo cual permitiría tener un producto CAR-NK ya preparado para cuando el paciente necesite. Sin embargo, las NK por sus propiedades intrínsecas demuestran una alta dificultad a ser infectadas y por tanto modificadas con un CAR. Los ensayos realizados con CAR-NK-19 para LNH demuestran que, a pesar de las dificultades de infección y expansión comparadas con un CART, es viable conseguir un CAR-NK-19 con CB-NK. Las células CB-NK son primero expandidas con un medio especial para NK+IL-2 e IL-15 y tras ser infectadas mediante lentivirus, son expandidas con células presentadoras de antígeno para obtener un mayor número de células. Sin embargo, los resultados demuestran que es necesario un mayor número de células CAR-NK para conseguir los mismos resultados que con un CART, aunque los resultados mejoran significativamente con la adición de la citoquina IL-2 durante el ensayo de citotoxicidad. También, hemos estudiado la posibilidad de unir ambas terapias CART+ CAR-NK consiguiendo unos resultados prometedores.