Amplificación de minigenomas RNA derivados del coronavirus de la gastroenteritis porcina transmisible por virus complementadores con distinto tropismo y virulencia

Abstract

En esta memoria se describe la amplificación del RNA de minilgenomas sintéticos derivados de RNA defectivos del virus TGEV por distintos virus complementadores con especificidad de tejido. Se seleccionaron un virus complementador totalmente atenuado con tropismo exclusivamente respiratorio, el aislado PUR46-PTV, y un virus complementador atenuado con tropismo respiratorio y entérico, el aislado PUR46-MAD. La amplificación del RNA del minigenoma M39 se asoció con los virus complementadores que replicaban con altos títulos y con la presencia de un motivo estructural de RNA alrededor del nucleótido 344 en el extremo 5' del RNA del minigenoma. Mediante la construcción de virus TGEV recombinante, se determinó que el determinante del tropismo entérico en el virus TGEV se localiza entorno al aminoácido 219 de la proteína S. Asimismo, se demostró que diferentes aislados del virus TGEV infectan células derivadas de mono (Vero) lo que significa un salto de la barrera de especie. Dependiendo del aislado del virus TGEV, se observó una infección lítica (PUR46-C11) o persistente (PUR46-MAD y PUR46-PTV). La infección lítica se asoció a la inducción de sincitios, mientras que en la infección persistente no se detectó una alteración aparente de las células infectadas. La proteína de la espícula fue la responsable de la inducción de sincitios. Utilizando las construcciones de los virus TGEV recombinantes, se determinó que un cambio de aminoácido, de glutamina a histidina, en el residuo 32 es sufienciente para conferir el fenotipo de fusión de membranas al aislado PUR46-PTV del virus TGEV. Para realizar estudios sobre las bases moleculares del tropismo y al mismo tiempo para generar un vector que induzca inmunidad frente a la infección por el virus PEDV se construyó un clon infectivo del virus TGEV con la proteína S del virus PEDV (TGEV-SPEDV/C11).