Study of the HCV polyprotein expression from an inducible vaccinia virus recombinant and its implication in the host-cell responses

Résumé

El virus de la hepatitis C (HCV) es el agente causal de la hepatitis no A y no B. La OMS estima que el 3% de la población mundial está clínicamente afectada por este virus. Más de la mitad de los casos progresan a infecciones crónicas que frecuentemente desarrollan cirrosis hepática que puede evolucionar a carcinoma hepatocelular. Sin embargo, el mecanismo de patogénesis es aún poco conocido debido a la falta de un sistema de cultivo celular y un modelo viral adecuado para la infección y replicación del virus. El virus vaccinia (VV) ha sido un vector ampliamente usado para la expresión de proteínas heterólogas, por ello hemos desarrollado un nuevo sistema de expresión basado en un virus recombinante del virus vaccinia y que denominamos VT7-HCV7.9. Este virus recombinante expresa de forma inducible las proteínas estructurales (Core, E1 y E2) y no estructurales (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y parte de NS5B) del ORF del subtipo 1b del HCV. Análisis por microscopía confocal y por Western blot han revelado que la poliproteína viral es eficientemente procesada en diferentes líneas celulares (Hela, BSC40 y HepG2) infectadas con el virus recombinante VT7-HCV7.9, expresándose las diferentes proteínas estructurales y no estructurales de HCV. Además, hemos visto que las proteínas de HCV expresadas a partir de VT7-HCV7.9 se localizan exclusivamente en el citoplasma con una distribución puntuada, colocalizan con el retículo endoplasmático (RE) y las mitocondrias y produce rotura del aparato de Golgi. En estudios por miscroscopía electrónica de células humanas infectadas con el virus recombinante, se observó que las proteínas de HCV inducen alteraciones en la arquitectura de las células infectadas caracterizadas por la pérdida de la organización del RE, hinchamiento de las mitocondrias, formación de red de membranas y de estructuras electrón densas en la red de membrana, dispersas en varias áreas. Dichas alteraciones s