Studying the role of Bcl2 and myc in the pathogenesis of diffuse large b cell lymphoma

Resumen

Aproximadamente un 30% de los pacientes con linfoma difuso de células B grandes (LDCBG) co-expresan BCL2 y MYC, los cuales se conocen como linfomas doble-expresantes (LDE). Estos linfomas se asocian con peor pronóstico y presentan peor respuesta al tratamiento estándar R-CHOP, y todavía no se han encontrado alternativas terapéuticas. Hay varios ensayos clínicos en marcha que evalúan el potencial de venetoclax para inhibir la proteína anti-apoptótica BCL2 en los linfomas de alto grado. También hay investigaciones en curso que intentan encontrar inhibidores específicos de MYC que se puedan usar de forma segura en la clínica. Por tanto, nuestro objetivo era aportar evidencias preclínicas in vivo para estas investigaciones, modelando el escenario LDE en nuevos modelos animales y demostrando que la combinación de inhibidores específicos de BCL2 o MYC con anti-CD20 puede mejorar la supervivencia a largo plazo en modelos animales de LDCBG-LDE. Para ello, primero generamos y caracterizamos tres modelos murinos transgénicos que recapitulan la compleja progresión y el microambiente tumoral característico del LDCBGDEL en ratón, replicando las clásicas alteraciones genéticas de estos pacientes mediante mutaciones condicionales que ocurren en etapas tempranas de la reacción de centro germinal. Además, demostramos que la transformación maligna de las células B de centro germinal dirigida por la expresión de NF-κB promueve la rápida co-expresión de BCL2 y MYC y reprime la apoptosis, acumulando inestabilidad genómica y sensibilizando a las células tumorales a la inhibición de BCL2 (con venetoclax) o de MYC (con MYCi975). Además, contribuimos con evidencias in vivo de que la combinación de venetoclax con inmunoterapia dirigida contra CD20 puede promover efectos sinérgicos contra las células tumorales del linfoma, mejorando la supervivencia de los ratones. No solo demostramos que esta sinergia incrementa la muerte de las células tumorales doble-expresantes de BCL2 y MYC en respuesta al tratamiento combinatorio, sino que también demostramos, por primera vez en LDCBG, que venetoclax promueve el enriquecimiento de las células T CD8+ efectoras activadas que infiltran el tumor, ejerciendo por tanto un papel inmunomodulador en el microambiente tumoral del LDCBG doble-expresante. También, demostramos que se acelera la linfomagénesis mediante la expresión forzada de MYC desde etapas tempranas de la reacción del centro germinal. Sin embargo, esta linfomagénesis estaba acompañada por la aparición de tumores gastrointestinales no derivados de células B, posiblemente debido a una activación inespecífica de la expresión de MYC, y que, por tanto, no responden a la inmunoterapia convencional anti-CD20 ni a un tratamiento antibiótico, empeorando por tanto la supervivencia de los ratones. En conjunto, nuestros resultados aportan tanto una prueba de concepto preclínica como una justificación de que incorporar venetoclax a los tratamientos basados en inmunoterapia frente a CD20 puede mejorar la respuesta en estos pacientes con LDCBGLDE. Además, aportamos nuevas evidencias para testar combinaciones con inhibidores de MYC, ya sea incorporándolos al tratamiento estándar actual R-CHOP o combinándolos con inhibidores específicos de BCL2, atacando así simultáneamente ambos talones de Aquiles del tumor. Estos ensayos preclínicos se pueden hacer tanto en nuestros modelos preclínicos como en la novedosa técnica de cultivo 3D que hemos implementado, que permite el cultivo a largo plazo de las células tumorales con su microambiente tumoral en forma de esferoides, pudiendo así hacer un cribado de nuevas estrategias terapéuticas ex vivo.